TLR3及其相關細胞因子在Bewo細胞抗HBV感染中的作用.pdf

1、目的：
　　 ①了解人胎盤滋養(yǎng)層細胞系Bewo細胞HBV感染與TLR3蛋白表達的關系；
　　 ②探討HBV刺激的Bewo細胞TLR3與其信號轉導過程相關細胞因子表達的關系；
　　 ③探討TLR3和相關細胞因子在Bewo細胞抗HBV中的作用。
　　 方法：
　　 (1)培養(yǎng)人胎盤滋養(yǎng)層細胞系Bewo細胞，分為PolyI：C(TLR3配體)刺激組及對照組Bewo細胞，采用FAC(流式細胞技術)測定的T

2、LR3表達；
　　 (2)采用100μlHBVDNA含量為5.0×106(copies/ml)的血清與Bewo細胞共培養(yǎng)作為HBV感染方法，設立三組：空白對照組，HBV刺激組，PolyI：C+HBV刺激組。于HBV刺激8h、16h、24h、48h后收集培養(yǎng)上清及細胞進行以下實驗：①FACS測定空白對照組、HBV刺激組和PolyI::C+HBV刺激組Bewo細胞TLR3的表達以及不同刺激時間點的TLR3表達變化；②用ELISA法(

3、酶聯(lián)免疫吸附法)檢測HBV刺激組和PolyI：C+HBV刺激組細胞培養(yǎng)液中IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-β的含量；③用FQ-PCR(熒光定量PCR)檢測HBV刺激組及PolyI：C+HBV刺激組細胞培養(yǎng)液以及Bewo細胞中HBVDNA病毒載量。
　　 結果：
　　 ①PolyI::C刺激組Bewo細胞TLR3蛋白平均熒光強度為53.58±3.11，對照組細胞為42.14±3.85，差別有統(tǒng)計學意義(

4、t=-10.721，P＜0.001)。
　　 ②用FAC檢測HBV刺激不同的時間點(8h、16h、24h、48h)Bewo細胞的TLR3蛋白含量，表達水平在空白對照組、HBV刺激組及PolyI：C+HBV刺激組中四個不同時間點均有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，對照組的Bewo細胞4個時間點內TLR3蛋白平均熒光強度分別為47.93、50.13、54.70、50.70，HBV刺激可使TLR3蛋白水平升高，在8h為59.85，16h為

5、70.45，24h為79.18，48h為87.27，且隨時間變化TLR3蛋白表達水平有升高趨勢，PolyI：C+HBV刺激組TLR3蛋白量高于對照組及HBV刺激組，8h為68.67，16h為82.98，24h達到94.08，48h為79.66，24hTLR3蛋白達到高峰值。
　　 ③與HBV刺激組相比，PolyI：C+HBV刺激組IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-β含量在不同的時間點(8h、16h、24h、48h)表達水

6、平均有顯著性差異，且隨著時間延長表達水平上升；TNF-α在與HBV共培養(yǎng)8h時表達量即開始上升，IL-6是在24h后升高幅度較大，IL-10的濃度在HBV感染組表現(xiàn)為遲緩上升，而PolyI：C+HBV感染組16h小時后上升幅度加大，IFN-β隨著與HBV共培養(yǎng)的時間的增加呈現(xiàn)低幅度緩慢上升。與HBV刺激組相比，PolyI：C+HBV刺激組IL-2表達量未呈現(xiàn)統(tǒng)計學差異。
　　 ④用FQ-PCR檢測HBVDNA，結果顯示：Poly

7、I：C+HBV刺激組培養(yǎng)上清中HBVDNA含量均低于HBV刺激組，在HBV刺激8h時，兩組HBVDNA含量尚未見統(tǒng)計學差異(t=3.635，P＞0.05)，但在刺激16h之后，兩組HBVDNA水平均有統(tǒng)計學差異(t=12.728，P＜0.05；t=7.603，P＜0.05：t=11.314，P＜0.05)。
　　 結論：
　　 ①HBV刺激后Bewo細胞TLR3蛋白表達增加；PolyI：C可通過上調Bewo細胞TLR3蛋