新型復(fù)合型生物多孔支架生物學(xué)性能評價.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)是通過對新型復(fù)合型生物多孔支架進(jìn)行體內(nèi)、體外生物安全性試驗(yàn)研究，評價其細(xì)胞毒性、組織相容性，為確保該材料臨床應(yīng)用的安全性提供有價值的理論依據(jù)。 方法： (1)采用掃描電鏡對新型復(fù)合型生物多孔支架進(jìn)行表面形態(tài)觀察。(2)細(xì)胞毒性試驗(yàn)：采用L929系小鼠成纖維細(xì)胞株進(jìn)行傳代培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞數(shù)量達(dá)到種植要求時，分別在新型復(fù)合型生物多孔支架的浸提液，聚乙烯浸提液(陰性對照)，0.64％苯酚溶液(陽性對照)中進(jìn)行培養(yǎng)。觀察細(xì)胞形態(tài)

2、，并用MTT法測定細(xì)胞毒性。(3)全身急性毒性試驗(yàn)：采用健康昆明系小鼠30只，18～24g，雌雄不限，10只為一個實(shí)驗(yàn)組。經(jīng)動物尾靜脈注射相應(yīng)藥液(10ml/kg，即0.2ml/只)，即新型復(fù)合型生物多孔支架的浸提液、生理鹽水、0.64％苯酚溶液。注射后24h、48h、72h稱量體重變化，并觀察一般狀態(tài)，毒性表現(xiàn)及死亡情況。(4)溶血試驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)以支架材料作為實(shí)驗(yàn)材料；以聚乙烯作為陰性對照；以聚氯乙烯作為陽性對照，相應(yīng)處理后分別加入稀釋

3、新鮮抗凝兔血，在分光光度計(jì)上，測取各材料的光密度值，計(jì)算出各自的溶血率。(5)兔成骨細(xì)胞的培養(yǎng)及與支架材料的聯(lián)合培養(yǎng)：取新西蘭大白兔2只，快速負(fù)壓抽取兔股骨骨髓2ml，培養(yǎng)骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，并對其進(jìn)行成骨誘導(dǎo)，促使骨髓基質(zhì)干細(xì)胞分化為成骨細(xì)胞；對成骨細(xì)胞進(jìn)行鑒定后，將新型復(fù)合型生物多孔支架與成骨細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)后，進(jìn)行掃描電鏡觀察。 結(jié)果： (1)新型復(fù)合型生物多孔支架表面形貌觀察：其結(jié)構(gòu)類似于生物活體的松質(zhì)骨構(gòu)架，它有利于骨組織的長

4、入和材料自身的生物降解。(2)細(xì)胞毒性試驗(yàn)：支架材料細(xì)胞毒性一直為0～1級，說明支架材料無明顯細(xì)胞毒性。(3)全身急性毒性試驗(yàn)：支架材料組和陰性對照組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，二者與陽性對照組存在顯著性差異。(4)溶血試驗(yàn)：支架組和陰性對照組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，二者與陽性對照組存在顯著性差異。支架材料的溶血率為3.199％，體外實(shí)驗(yàn)不引起溶血反應(yīng)。(5)兔成骨細(xì)胞與支架材料的聯(lián)合培養(yǎng)：掃描電鏡下可見附著于材料表面和孔隙的細(xì)胞數(shù)量較多，并向孔隙深部