流式微球技術(shù)檢測(cè)血小板特異性自身抗體的方法建立及臨床應(yīng)用.pdf

1、研究背景:特發(fā)性血小板減少性紫癜(Idiopathic Thrombocytopenic Purpura,ITP)主要是由于血小板特異性自身抗體(Platelet-specific autoantibody)介導(dǎo)的血小板破壞引起血小板減少所致的出血性疾病,ITP的診斷國(guó)內(nèi)外仍依賴(lài)臨床排除性診斷,缺乏特異性[1-2]。目前國(guó)內(nèi)外針對(duì)血小板膜糖蛋白(Glycoprotein,GP)自身抗體的檢測(cè)方法主要有單克隆抗體特異性血小板抗原固定術(shù)(M

2、onoclonal antibody immobilization ofplatelet antigen technique,MMPA)[3]和放射免疫微球法(Radioactive immunobead)[4]等,這些方法特異性較高(78％-93％),但敏感性偏低(49％-66％),且由于方法學(xué)上的限制而無(wú)法在臨床上普及。因此,建立一套靈敏、快速、準(zhǔn)確、可行的檢測(cè)血小板自身抗體的方法是必要的。
　　 目的:建立流式微球技術(shù)檢測(cè)

3、血小板特異性自身抗體方法,并對(duì)其方法學(xué)及臨床應(yīng)用進(jìn)行初步探討。
　　 方法:應(yīng)用分別包被抗GP I b,Ⅱb,ma和Ⅱb/Ⅲa單克隆抗體SZ2,SZ22,SZ21和7E3的微球捕獲血小板特異性抗體復(fù)合物,加入FITC標(biāo)記羊抗人多克隆抗體,并在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)分析。同時(shí)與改良間接MAIPA法檢測(cè)標(biāo)本血漿中血小板特異性自身抗體的結(jié)果比較。通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化檢測(cè)條件,并進(jìn)行方法學(xué)評(píng)價(jià)和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果:每批實(shí)驗(yàn)同時(shí)檢測(cè)3名健

4、康人,以健康人血小板特異性抗體的平均熒光強(qiáng)度(Mean fluorescence intensity,MFI)均值作為基本對(duì)照,計(jì)算各個(gè)標(biāo)本的MFI值與基本對(duì)照的比率并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。用分別包被有單克隆抗體SZ2,SZ22,SZ21和7E3的微球檢測(cè)ITP組各個(gè)標(biāo)本的抗GPⅠb,Ⅱb,Ⅲa和Ⅱb/Ⅲa自身抗體的MFI值,各MFI值與基本對(duì)照的比率中位數(shù)及上下限分別為1.49(0.88-16.24)、1.55(0.84-11.30)、1.

5、50(0.87-11.04)、1.51(0.84-9.81)；非ITP組比率中位數(shù)及上下限分別為1.12(1.00-1.33)、1.13(1.03-1.29)、1.13(0.97-1.32)、1.05(0.86-1.13)；正常對(duì)照組比率中位數(shù)及上下限分別為1.01(0.95-1.37)、0.99(0.85-1.24)、1.01(0.85-1.48)、1.01(0.74-1.19),非參數(shù)檢驗(yàn)得ITP組MFI比率與非ITP血小板減少組和

6、正常對(duì)照組有顯著差異(P<0.01)。若將ITP組比率分別大于正常對(duì)照組上限1.37、1.24、1.48、1.19判為陽(yáng)性,則流式微球技術(shù)檢測(cè)血小板特異性自身抗體的敏感性74.12％,4種單克隆抗體聯(lián)合檢測(cè)總體敏感性明顯高于改良間接MAIPA(P<0.05),特異性為94.28％,且大于各單個(gè)抗體檢測(cè)敏感性。
　　 結(jié)論:流式微球技術(shù)可以簡(jiǎn)便、快捷的檢測(cè)血小板膜糖蛋白特異性抗體,其敏感性高于改良間接MAIPA。多種自身抗體聯(lián)合檢