水通道蛋白AQP-1、AQP-4與慢傳輸型便秘的相關性研究.pdf

1、目的:當前社會,隨著人們飲食習慣的改變和生活節(jié)奏的加快,便秘已經(jīng)成為嚴重影響人們健康和日常生活工作的一種常見疾病。世界衛(wèi)生組織專門為此制定了羅馬-Ⅲ診斷標準來指導臨床便秘的診斷和治療。其中慢傳輸型便秘是其中最為常見和嚴重的一種類型,具體到臨床就是指患者出現(xiàn):大便量太少、太硬、排出太困難,或合并一些特殊癥狀,如:長時間用力排便、直腸脹感、排便不盡感,甚至需用手法幫助排便;在不使用瀉劑的情況下,7天內自發(fā)性排空糞便不超過2次或長期無便意。便

2、秘患者特別是慢傳輸型便秘患者往往是十分痛苦的,而且常常引起其它疾病,危害人類健康。因此,如何更好,更徹底的治愈此病就成為醫(yī)務工作者的責任,但是治病求因,而當前對于便秘的發(fā)病原因的研究尚處于起步階段,鑒于此,本研究試從分子生物學角度來探討慢傳輸型便秘的發(fā)病原因。應用免疫組化、圖像分析等技術來研究AQP-1、AQP-4在慢傳輸型便秘患者結腸黏膜上的表達與正常人結腸黏膜上表達的差異來推斷,水通道蛋白AQP-1、AQP-4在慢傳輸型便秘患者疾病

3、發(fā)生發(fā)展中所起的作用及意義。
　　 方法:選取河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院肛腸外科08年9月份-09年11月份經(jīng)初診,詳細詢問病史、體格檢查、實驗室檢查等排除腸梗阻和巨結腸等其它器質性病變,符合羅馬-Ⅲ標準,行3粒標記物120小時法結腸傳輸試驗,結果回報72-120小時尚有≥20％的標記物殘存于結腸中的慢傳輸型便秘患者25例,所有患者均住院行結腸次全切除手術,術后標本取近端升結腸和遠端降結腸,每位患者各取兩處;取正常人(為無便秘及長期服

4、用瀉劑輔助排便病史者,無腹瀉等其他類似病史者)的升結腸和降結腸結腸標本20例作為對照組。分組方法:全部標本分為四組,①試驗組1:慢傳輸型便秘患者25例的升結腸結腸標本,男性2例,女性23例,年齡36～71歲,平均年齡48.60±2.00歲,便秘病史1～23年,平均5.25±1.50年:②試驗組2:慢傳輸型便秘患者的降結腸結腸標本,患者資料同①;③對照組1:無便秘史患者升結腸部位標本20例,男性1例,女性19例,年齡33～68歲,平均年齡

5、43.72±1.50歲:④對照組2:同對照組1,取其降結腸部位標本。試驗組和對照組的性別、年齡、病史的差別無統(tǒng)計學意義。
　　 所取標本全部用4％多聚甲醛灌流固定,24小時后將固定好的組織塊經(jīng)常規(guī)梯度酒精脫水,二甲苯透明,石蠟包埋。接下來把包埋好的石蠟塊在切片機上,連續(xù)切片,厚度為5μm,取其中四片分別裱于涂有蛋白甘油(用于普通HE染色)及多聚賴氨酸(用于免疫組織化學染色)的載玻片上,最后分別用HE和免疫組化的方式給選取的切片染

6、色。最后在高倍鏡下分別觀察AQP-1、AQP-4的表達并用人工計數(shù)和自動圖像分析兩種方法檢測其在正常人結腸與慢傳輸型便秘患者中結腸的表達差別。
　　 結果:
　　 1 AQP-1在25例慢傳輸型便秘患者和20例正常人結腸黏膜上皮細胞頂端、基底側和腔面都有表達,且主要表達于吸收細胞,杯狀細胞有少量表達,表達陽性率為100％。表達部位在升結腸和降結腸無明顯差異(p＞0.05)。但慢傳輸型便秘患者(試驗組)結腸黏膜細胞上的表達

7、明顯高于正常人(對照組)結腸黏膜細胞上的表達。統(tǒng)計學分析后顯示慢傳輸型便秘患者即實驗組和正常人即對照組結腸黏膜上AQP-1表達有顯著差異,差別有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2 AQP-4在正常人(對照組)升結腸和降結腸結腸黏膜上皮細胞上未見表達,在慢傳輸型便秘患者(試驗組)升結腸結腸上皮細胞有少量表達,降結腸上無表達。其中25例慢傳輸型便秘患者僅有4例發(fā)現(xiàn)有少量AQP-4在升結腸結腸黏膜上皮細胞的基底部位有少量表達,陽性

8、表達率不足20％。統(tǒng)計學分析后顯示慢傳輸型便秘患者即實驗組和正常人即對照組結腸黏膜上AQP-4表達無顯著性差異,差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　 結論:
　　 1 AQP-1在全結腸都有表達,升結腸和降結腸無差異,但慢傳輸型便秘患者結腸黏膜與正常人結腸黏膜相比顯著高表達。說明AQP-1在結腸對于水的重吸收中起了重要作用,可能對于慢傳輸型便秘的發(fā)生、發(fā)展有一定的作用。
　　 2 AQP-4在本實驗研究中正常