AQP-4在實(shí)驗(yàn)性癲癇大鼠腦組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的： 觀察癲癇大鼠腦組織中水通道蛋白4(Aquaporin-4，AQP4)表達(dá)的變化，探討AQP4與癲癇的關(guān)系，并將水的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)問(wèn)題引入癲癇的研究領(lǐng)域。 方法： 1、動(dòng)物模型的建立。將26只成年SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=6)和PTZ組(n=20)。PTZ組以PTZE亞抽搐劑量每天對(duì)SD大鼠進(jìn)行腹腔注射，連續(xù)注射28d，觀察點(diǎn)燃率。第30d宰殺全部動(dòng)物，迅速斷頭取腦，于冰盤上快速分離出海馬，以備實(shí)驗(yàn)。

2、2、腦組織水含量的測(cè)定和AQP4表達(dá)變化的測(cè)定。采用干-濕重法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)各組腦組織含水量的變化；應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reversetranscriptase-polymerase chain reaction，RT-PCR)方法檢測(cè)癲癇大鼠腦組織中AQP4mRNA的表達(dá)，免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠海馬組織中AQP4的表達(dá)和分布，利用計(jì)算機(jī)圖象對(duì)比分析各組大鼠腦組織中AQP-4的表達(dá)水平。 結(jié)果： l、SD大鼠總點(diǎn)燃率

3、達(dá)50％。 2、腦組織水含量檢測(cè)結(jié)果顯示，癲癇點(diǎn)燃組大鼠腦組織水含量[(76.8±3.81)％]明顯增加(p<0.05)，而未點(diǎn)燃組大鼠腦水含量[(73.3±2.63)％]與正常生理鹽水組[(71.5±2.88)％]比較未見明顯差異(p>0.05)；RT-PCR結(jié)果顯示，點(diǎn)燃組大鼠腦組織中AQP-4mRNA的表達(dá)(0.85±0.11)，明顯高于未點(diǎn)燃組(0.37±0.07)和生理鹽水組(0.33±0.08)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p

4、<0.05)，而未點(diǎn)燃組和生理鹽水組間AQP4的表達(dá)未見明顯的差異(p>0.05)。免疫組化AQP-4陽(yáng)性細(xì)胞胞膜呈棕褐色或者棕黃色，鏡下可見AQP4陽(yáng)性顆粒主要分布于大鼠海馬CA1，CA3區(qū)錐體細(xì)胞及齒狀回顆粒細(xì)胞，及血管周圍細(xì)胞也見表達(dá)。點(diǎn)燃組陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目增多，點(diǎn)燃組的AQP4平均光密度值(0.201±0.04)高于對(duì)照組(0.091±0.02)及未點(diǎn)燃組(0.104±0.02)(p<0.05)。而未點(diǎn)燃組和對(duì)照組間的陽(yáng)性表達(dá)無(wú)

5、明顯差異(p>0.05)。 結(jié)論 1．神經(jīng)細(xì)胞外間隙相對(duì)容積的改變已經(jīng)被證實(shí)與癲癇發(fā)作的易感性有關(guān)。AQP-4是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的水通道，參與了水的轉(zhuǎn)運(yùn)，水的轉(zhuǎn)移必然伴有離子的變化，影響神經(jīng)元的穩(wěn)定性，本研究發(fā)現(xiàn)，癲癇點(diǎn)燃組大鼠腦組織中AQP-4表達(dá)水平明顯升高，提示在癲癇形成過(guò)程中，AQP-4可能調(diào)節(jié)了細(xì)胞的神經(jīng)興奮性，介導(dǎo)癲癇活動(dòng)。 2．癲癇點(diǎn)燃組大鼠腦組織水含量明顯增加與海馬中AQP4mRNA的表達(dá)呈正