BN52021對(duì)重癥急性胰腺炎胰腺組織PLC-β-,2-活性的影響.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:重癥急性胰腺炎(Severe acute pancreatitis,SAP)是一種以血流動(dòng)力學(xué)改變和全身炎癥反應(yīng)為特征、死亡率高的疾病。SAP的發(fā)病機(jī)制至今尚未闡明,臨床尚無(wú)有效的治療措施。細(xì)胞因子的釋放造成了全身性的反應(yīng),如:全身炎癥反應(yīng)綜合癥(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、多器官功能障礙綜合征(multipie organ dysfunction syndrome,

2、MODS)、成人呼吸窘迫綜合征(adult respiratory distress syndrome,ARDS)、敗血病等。此外細(xì)胞因子在作為SAP主要致死原因的多器官衰竭中起著軸心作用。關(guān)于細(xì)胞因子誘導(dǎo)SIRS的二次打擊學(xué)說(shuō)則解釋了不同個(gè)體對(duì)SAP的多樣性反應(yīng)。銀杏苦內(nèi)酯B(Ginkgolide B,BN52021)是銀杏葉提取物中重要的有效成分,對(duì)SAP具有治療作用,是炎性介質(zhì)血小板活化因子(Platelet activating

3、 factor,PAF)的強(qiáng)拮抗劑,具有抗炎、抗血栓和抗休克形成等多種藥理作用,但其作用機(jī)制至今未明。PAF在體內(nèi)主要通過(guò)特異性的血小板活化因子受體(Platelet activating factor receptor,PAF-R)將信號(hào)傳遞至細(xì)胞內(nèi),調(diào)節(jié)細(xì)胞的生命活動(dòng)。PAF-R屬于七次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體家族,活化后偶聯(lián)于特異性的異三聚體G蛋白,開啟胞內(nèi)相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
   通過(guò)建立Wistar大鼠SAP模型,并以B

4、N52021進(jìn)行干預(yù)治療,觀察胰腺組織病理和檢測(cè)血清淀粉酶,研究BN52021對(duì)大鼠SAP的影響、BN52021治療大鼠SAP的最佳量效關(guān)系,以及Wistar大鼠SAP模型在應(yīng)用BN52021治療后對(duì)胰腺組織磷脂酶C-β2(phospholipase C-β2,PLC-β2)活性的影響。
   方法:第一部分:采用180只雄性Wistar大鼠,體重200-250g,隨機(jī)數(shù)字表法分為正常對(duì)照組(NC,n=60),SAP組(SAP,

5、n=60)及BN52021治療組(BN,n=60),每組再分為6個(gè)時(shí)相點(diǎn)(1h、2h、3h、6h、12h、24h),各組10只。用胰膽管插入逆行注射牛磺膽酸鈉制備SAP大鼠模型;各組分別在處理后1h、2h、3h、6h、12h、24h麻醉并開胸和開腹,迅速采集心臟血液和胰腺組織。采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清淀粉酶,取一部分胰腺組織放入液氮速凍,——80℃超低溫冰箱妥善保存;另一部分以中性緩沖甲醛固定(40g/L),石蠟包埋切片后HE染色制

6、片,觀察胰腺組織的病理學(xué)變化。
   第二部分:Wistar大鼠70只,用隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組(SO,n=10),SAP模型組(SAP,n=10),0.5%二甲基亞砜(DMSO)對(duì)照組(DMSO,n=10),2.5mg/kg BN52021治療組(BN1,n=10),5mg/kg BN52021治療組(BN2,n=10),10mg/kg BN52021治療組(BN3,n=10),20μg/kg善寧治療組(作為陽(yáng)性對(duì)照)(SS

7、,n=10),共七組。用藥代動(dòng)力學(xué)方法研究BN52021治療大鼠SAP的最佳量效關(guān)系。
   第三部分:第一部分中凍存的胰腺組織,用Western blot法檢測(cè)PLC-β2的表達(dá)與激活,用Bio-Rad圖像處理系統(tǒng)采集X線片的條帶,用Quantity One圖像分析軟件進(jìn)行條帶灰度掃描。所有實(shí)驗(yàn)結(jié)果均用x±s表示,采用統(tǒng)計(jì)學(xué)SPSS軟件進(jìn)行
   結(jié)果:第一部分:血漿淀粉酶結(jié)果顯示,各時(shí)相點(diǎn)SAP組與NC組相比較顯著升

8、高(P<0.05),BN組也較NC組顯著升高(P<0.05),但BN組在1h,2h,3h,6h和24h較SAP組顯著降低(P<0.05)。病理學(xué)結(jié)果顯示,SAP組隨著時(shí)間的推移,胰腺及周圍組織水腫、出血和壞死面積逐漸擴(kuò)大,程度逐漸加重,而BN組較SAP組的組織結(jié)構(gòu)破壞相對(duì)較輕,NC組胰腺及周圍組織結(jié)構(gòu)大致正常。
   第二部分:血清淀粉酶、磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)、腹水、胰腺組織病理學(xué)和胰腺組織P

9、AF-R mRNA表達(dá)的結(jié)果顯示在2.5mg/kg、5.0mg/kg、10.0mg/kg BN52021三個(gè)劑量中,5.0mg/kg BN52021給Wistar大鼠靜脈注射治療SAP具有最佳的量效關(guān)系(P<0.05)。
   第三部分:1小時(shí)至3小時(shí),NC組、SAP和BN組PLC-β2均于3小時(shí)降至最低點(diǎn)。6小時(shí)至24小時(shí),NC組PLC-β2于6小時(shí)升至最高點(diǎn),隨后又逐漸降低;而SAP組PLC-β2于6小時(shí)至24小時(shí)逐漸升高。

10、給予BN52021治療后,6小時(shí)至24小時(shí)PLC-β2組在SAP組的基礎(chǔ)上降低,且在12小時(shí)和24小時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01,P<0.01)。
   結(jié)論:第一部分:逆行胰膽管內(nèi)注射5%牛磺膽酸鈉可以成功制備大鼠SAP模型,而且BN52021對(duì)SAP有一定的治療作用。
   第二部分:用5mg/kg BN52021靜脈注射治療Wistar大鼠SAP具有最佳的量效關(guān)系。
   第三部分:BN52021能夠部分抑

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