血小板活化因子受體拮抗劑BN52021在大鼠重癥急性胰腺炎早期病程中的作用和機(jī)制.pdf

1、目的： 探討血小板活化因子受體(PAF-R)拮抗劑BN52021在大鼠重癥急性胰腺炎(SAP)早期病程中的作用和機(jī)制。 方法： 1.用免疫組織化學(xué)染色方法研究PAF-R在Wistar大鼠胰腺的定位和分布。 2.用胰膽管插入逆行注射牛磺膽酸鈉制備SAP大鼠模型；用藥代動(dòng)力學(xué)方法研究BN52021治療大鼠SAP的最佳量效關(guān)系。 3.用RT-PCR和Westernblot方法分別研究PAF-R和核因子κ

2、B單體(NF-κBp65)mRNA和蛋白質(zhì)在SAP大鼠胰腺組織的動(dòng)態(tài)變化以及BN52021的影響。 結(jié)果： 1.冰凍切片中顯示在Wistar大鼠正常胰腺組織微血管內(nèi)皮細(xì)胞有PAF-R表達(dá)；石蠟切片中顯示胰島細(xì)胞有PAF-R表達(dá)，主要分布于細(xì)胞漿和細(xì)胞核，核膜著色較深，但是血管內(nèi)皮細(xì)胞著色較淺。 2.血清淀粉酶、PLA2、腹水、胰腺組織病理學(xué)和胰腺組織PAF-RmRNA表達(dá)的結(jié)果顯示在2.5mg/kg、5.0mg/

3、kg、10.0mg/kgBN52021三個(gè)劑量中，5.0mg/kgBN52021靜脈注射給Wistar大鼠治療SAP具有最佳的量效關(guān)系(P＜0.05)；這些結(jié)果也顯示sAP模型制備是成功的。 3.PAF-RmRNA結(jié)果顯示，SAP模型(SAP組)和BN52021治療后(BN組)均是動(dòng)態(tài)變化的，早期逐漸上升，在3h達(dá)到高峰，以后逐漸降低，除1h和2h外其余各時(shí)相點(diǎn)與假手術(shù)動(dòng)物(SO組)相比有顯著性差異(P＜0.05)，除6h外BN

4、組與SAP組各時(shí)相點(diǎn)之間無(wú)顯著性差異；PAF-R蛋白質(zhì)結(jié)果顯示，SAP組和BN組PAF-R蛋白質(zhì)與PAF-RmRNA的變化趨勢(shì)基本是一致的，先升后降，除1h外其余各時(shí)相點(diǎn)與SO組有顯著性差異(P＜0.05)，BN組與SAP組各時(shí)相點(diǎn)之間無(wú)顯著性差異。 4.NF-κBp65mRNA結(jié)果顯示，SAP組和BN組均是動(dòng)態(tài)變化的，呈雙峰改變，SAP組雙峰頂分別在1h和24h，BN組雙峰頂分別在1h和12h，于6h降至最低，SAP組在2h、

5、3h、12h和24h較SO組顯著增加(P＜0.05)，BN組在1h較SAP組顯著增加(P＜0.05)，BN組各時(shí)相點(diǎn)較SO組顯著升高(P＜0.05)；NF-κBp65蛋白質(zhì)結(jié)果顯示，sAP組在1h，3h和6h較SO組顯著升高(P＜0.01)，在2h，12h和24h較SO組也顯著升高(P＜0.05)，BN組各時(shí)相點(diǎn)較SO組顯著升高(P＜0.05)，在1h，3h和6h較SAP組顯著降低(P＜0.05)。 結(jié)論： 1.研究發(fā)現(xiàn)

6、PAF-R不僅定位分布于Wistar大鼠胰腺微血管內(nèi)皮細(xì)胞，也定位分布于其胰腺胰島細(xì)胞胞漿和細(xì)胞核內(nèi)。 2.經(jīng)胰膽管插入逆行注射?；悄懰徕c制備SAP大鼠模型是可靠的；用5.0mg/kgBN52021靜脈注射治療Wistar大鼠SAP具有最佳的量效關(guān)系。 3.PAF-R在SAP大鼠胰腺組織表達(dá)是動(dòng)態(tài)變化的，PAF-R可能參與了SAP的發(fā)病機(jī)制，對(duì)SAP病情的發(fā)生發(fā)展起一定的作用；BN52021可降低SAP血清淀粉酶和改善其

7、病理變化，但對(duì)胰腺組織PAF-R的表達(dá)無(wú)顯著影響。分析認(rèn)為，BN52021治療SAP大鼠并不是通過(guò)調(diào)控胰腺組織PAF-R的表達(dá)量，而是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制上升的PAF與同時(shí)表達(dá)量上升的PAF-R結(jié)合，從而影響PAF-R的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，實(shí)現(xiàn)它的治療作用。 4.NF-kB是PAF-R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路下游的關(guān)鍵成分。NF-kBp65在SAP大鼠胰腺組織表達(dá)是動(dòng)態(tài)變化的，NF-kBp65可能參與了SAP的發(fā)病機(jī)制，對(duì)SAP病情的發(fā)生發(fā)展起一定的作用；