血壓的腎臟調(diào)節(jié)：miR-29參與高血壓腎損傷的機制及Renalase與ESRD患者自主神經(jīng)活性的關系.pdf

1、第一部分 TNFα及其受體在SS及SS-13BN大鼠腎髓質的表達
　　目的：檢測并比較TNFα及其受體TNFRSF1A在SS及SS-13BN大鼠腎髓質的表達。方法：1將SS及SS-13BN大鼠（n=9）分為4組：SS低鹽飲食（0.4％）組、SS高鹽飲食（4%）組、SS-13BN低鹽飲食（0.4%）組、SS-13BN高鹽飲食（4%）組。所有大鼠以低鹽飲食喂養(yǎng)至7周齡，處死低鹽組大鼠并分離腎髓質組織。換高鹽飲食喂養(yǎng)高鹽組大鼠至8周齡，

2、處死大鼠并分離腎髓質組織。2將SS大鼠（n=6）分為3組：低鹽飲食（0.4%）組、高鹽（4%）3天組、高鹽（4%）7天組。所有大鼠以低鹽飲食喂養(yǎng)至6周齡，處死低鹽組大鼠。換高鹽飲食，并于高鹽3天、7天分別處死高鹽組大鼠并分離腎髓質組織。利用實時定量PCR技術檢測各組腎髓質TNFα及其受體TNFRSF1A的表達。結果：SS大鼠高鹽7天后腎臟外髓部的TNFα水平顯著高于低鹽組，且這種變化不存在于 SS-13BN大鼠中。SS大鼠高鹽3天組腎髓

3、質 TNFα較低鹽組無顯著變化；且SS大鼠高鹽7天組的腎髓質TNFα水平顯著高于高鹽3天組及低鹽組；TNFRSF1A在各組變化均無顯著差異。結論：腎髓質的TNFα表達水平在SS大鼠高鹽飲食3-7天內(nèi)迅速上升，并顯著高于低鹽組。TNFα可能在SS大鼠血壓調(diào)節(jié)及腎臟損傷過程中起重要作用
　　第二部分 TNFα對mTAL細胞miR-29家族及纖維化相關基因的影響
　　目的：探討TNFα對mTAL細胞miR-29家族及纖維化相關基因

4、的影響。方法：培養(yǎng)mTAL細胞并以TNFα刺激24h、48h，檢測各組細胞中miR-29及纖維化相關基因的表達；培養(yǎng)mTAL細胞，過表達miR-29并以TNFα刺激24h，檢測各組細胞中纖維化相關基因的表達；培養(yǎng)mTAL細胞，轉染NFkB p65 siRNA并以TNFα刺激24h，檢測各組細胞中miR-29及纖維化相關基因的表達。結果：TNFα刺激 mTAL細胞24小時或48小時，能顯著下調(diào) miR-29家族基因的表達，且上調(diào)纖維化相關

5、基因Acta2、Col4a1、Col4a2的水平；過表達miR-29a能顯著下調(diào)Acta2、Fn1、Col4a1、Col4a2的基因表達；過表達的miR-29c能顯著下調(diào)Col4a1、Col4a2的基因表達，且miR-29c顯著減輕了TNFα誘導的Col4a1、Col4a2的上調(diào)；NFkB p65 siRNA轉染顯著上調(diào)miR-29、下調(diào)Col4a1、Col4a2，且逆轉由TNFα下調(diào)的miR-29的表達。結論：TNFα可能通過NF-κ

6、B途徑下調(diào)miR-29的表達；NF-κB途徑的抑制可能對腎臟纖維化起保護作用；Acta2、Fn1可能是miR-29a的潛在靶基因；miR-29c對TNFα誘導的纖維化有保護作用。
　　第三部分 TNFα抑制劑依那西普腎內(nèi)注射對SS大鼠血壓、miR-29及腎損傷的影響
　　目的：探討TNFα抑制劑依那西普腎內(nèi)注射對SS大鼠血壓、miR-29及腎損傷的影響。方法：將SS大鼠分為依那西普組和生理鹽水對照組（n=6）。以低鹽飲食（0

7、.4%）喂養(yǎng)至6周齡，行右腎切除術。繼續(xù)喂養(yǎng)至7周齡，行股動脈置管測壓術及腎內(nèi)導管植入術。術后7天開始測量血壓。記錄基礎血壓3天后開始腎內(nèi)注射依那西普，并于依那西普處理后3天換高鹽飲食（4%）繼續(xù)喂養(yǎng)2周。處死大鼠并收集組織，分析各組大鼠血壓、miR-29及腎損傷的變化。結果：腎內(nèi)注射依那西普能顯著降低SS大鼠血壓；依那西普處理組呈現(xiàn)出蛋白管型、腎髓質纖維化減輕的趨勢；腎臟內(nèi)髓的miR-29家族在依那西普組呈現(xiàn)上升趨勢，且纖維化相關基因

8、呈現(xiàn)下調(diào)趨勢。結論：腎內(nèi)TNFα在SS大鼠血壓調(diào)節(jié)過程中起重要作用；依那西普可能通過降低血壓、上調(diào)miR-29表達從而減輕腎臟纖維化。
　　第四部分 Renalase與終末期腎病患者自主神經(jīng)活性的關系
　　目的：探討Renalase與終末期腎病患者自主神經(jīng)活性的關系。方法：選擇2011年7月至2012年6月期間于上海市第六人民醫(yī)院腎臟內(nèi)科治療的ESRD患者30例及健康志愿者16例。其中行血液透析者14例，腹膜透析者16例。對

9、所有入選者行24小時動態(tài)心電圖監(jiān)測以分析SDNN、RMSSD、PNN50等心率變異性指標，并檢測患者血紅蛋白、血脂、血肌酐等生化代謝指標及血清 renalase、兒茶酚胺水平，分析renalase與其他參數(shù)的相關性。結果：血液透析及腹膜透析患者的Max-HR、Min-HR和Ave-HR均顯著高于健康對照組，且SDNN、RMSSD和PNN50較健康對照組顯著降低；血液透析及腹膜透析患者的血清renalase與Ave-HR顯著負相關，與SD