蚯蚓纖溶酶對肝癌細(xì)胞增殖及CD44v6表達影響的體內(nèi)外研究.pdf

1、目的：探討蚯蚓纖溶酶（earthworm fibrinolytic enzyme，EFE）對人肝癌細(xì)胞的增殖是否具有抑制作用，及其對粘附分子CD44v6表達的影響。 方法：（1）體外實驗：體外培養(yǎng)人肝癌SMMC-7721細(xì)胞，分為對照組和不同濃度EFE組，采用WST-1法檢測細(xì)胞增殖抑制率，并采用RT-PCR方法檢測CD44v6mRNA的表達情況，Western Blot法觀察各組細(xì)胞CD44v6蛋白表達的變化。（2）體內(nèi)實驗：

2、建立SMMC-7721細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，隨機分為生理鹽水組、EFE組、5-Fu組及EFE+5-Fu聯(lián)合用藥組，分別處理4周后，剝離腫瘤組織，計算瘤重抑制率；并采用RT-PCR方法檢測EFE組CD44v6 mRNA的表達情況，免疫組化和Western Blot方法觀察各組EFE對CD44v6蛋白表達的影響。同時進行肝腎組織HE染色，評價藥物毒副反應(yīng)。 結(jié)果：（1）體外實驗：EFE作用于SMMC-7721細(xì)胞株24、48、72小時

3、的IC50分別為7．86、5．67、4．23 uku/ml，細(xì)胞增殖抑制率結(jié)果提示EFE對SMMC-7721細(xì)胞的抑制作用在一定濃度范圍內(nèi)呈時間劑量依賴關(guān)系。RT-PCR結(jié)果顯示，與對照組相比，3、4、5 uku/ml濃度的EFE作用48h后，CD44v6 mRNA表達量分別下調(diào)14．56％、27．11％、38．70％，差異均有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0．01）。Western Blot結(jié)果表明，3、4、5 uku/ml濃度的EFE作用4

4、8h后，CD44v6蛋白的表達量與對照組相比分別下調(diào)14．47％、31．07％、56．60％，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P均<0．05）。（2）體內(nèi)實驗：與生理鹽水組相比，EFE組、5-Fu組及聯(lián)合用藥組抑瘤率分別為20．53％、23．07％和54．20％；免疫組化和Western Blot結(jié)果顯示，EFE組CD44v6蛋白的表達水平較生理鹽水組分別下調(diào)47．16％、28．37％（P均<0．05）。RT-PCR結(jié)果表明，EFE組CD44v6