膜-細(xì)胞骨架連接分子Ezrin及CD44v6對胃癌生長和轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、前言
　　 Ezrin屬于ERM（Ezrin-Radixin-Moesin）家族成員之一，其編碼基因位于染色體6q25-q26，ERM蛋白的C末端與細(xì)胞骨架的actin相連，N末端通過與細(xì)胞表面的粘附分子Cadherin，CD44等粘附因子相連，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞-細(xì)胞，細(xì)胞-間質(zhì)的粘附性來影響腫瘤的侵襲性。Ezrin蛋白首先在1981年在雞的腸上皮絨毛中發(fā)現(xiàn)，它富含于含肌動蛋白的細(xì)胞絨毛和細(xì)胞膜的皺襞中并參與上皮細(xì)胞的膜動力學(xué)。Ez

2、rin蛋白幾乎存在于任何細(xì)胞中，在胃，小腸，肺，胰腺和腎組織有較高的表達(dá)。在脾，胸腺，淋巴結(jié)和骨髓中有中等表達(dá)。在心臟，睪丸和肌肉中有較低表達(dá)。在正常組織中Ezrin蛋白參與形成細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)的形成如偽足和絨毛等，并形成細(xì)胞與細(xì)胞，細(xì)胞與基質(zhì)的粘附，細(xì)胞間信號的傳導(dǎo)和細(xì)胞的運(yùn)動。近年來的研究發(fā)現(xiàn)Ezrin基因的表達(dá)在腫瘤的發(fā)生，浸潤和轉(zhuǎn)移中也起到重要作用。檢測正常胃粘膜，非典型增生，胃癌和轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中Ezrin和CD44v6蛋白和基因表達(dá)

3、，并分析其在不同病例中的表達(dá)的差異和聯(lián)系。討論Ezrin和CD44v6的蛋白和mRNA表達(dá)與胃癌浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)系和意義。
　　 材料和方法
　　 收集中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院2008年10月-2009年6月手術(shù)切除胃癌標(biāo)本84例（其中每例標(biāo)本距離腫瘤邊緣5厘米以上正常胃粘膜做對照）每個(gè)病例及對照均石蠟包埋，4微米連續(xù)切片，并行HE染色。
　　 免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果判定：用S-P免疫組織化學(xué)方法檢測正常胃粘膜組、

4、胃癌組、轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)組中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的表達(dá)。鼠抗人Ezrin蛋白單克隆抗體（工作濃度1:300）購自SANDA公司，鼠抗人CD44v6單克隆抗體（工作濃度為1:200）購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。結(jié)果的判斷方法，按照Birneretal報(bào)道的方法隨即選擇5個(gè)高倍鏡視野（x400）每個(gè)視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，共1000個(gè)細(xì)胞，陽性細(xì)胞少于或等于10％為陰性；無論其染色強(qiáng)度如何均記為0分；陽性細(xì)胞11-50％記為2分；陽

5、性細(xì)胞51-80％記為3分；陽性細(xì)胞為>80％記為4分。根據(jù)顯色分弱顯色1分；中等為2分；高強(qiáng)度為3分，細(xì)胞陽性表達(dá)<10％（-），以上兩組相加3分（+）；4-5分（++）；6-7分（+++）。RT-PCR熒光定量結(jié)果根據(jù)△CT=（實(shí)驗(yàn)組-內(nèi)參組）-（對照組-內(nèi)參組）值大小來判斷胃癌組織中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白mRNA表達(dá)量。
　　 結(jié) 果
　　 Ezrin蛋白表達(dá)在細(xì)胞漿中，胃癌組織中的陽性表達(dá)率為（84.5

6、％）；正常胃粘膜Ezrin蛋白陽性表達(dá)率為（61.9％）；轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)Ezrin蛋白陽性表達(dá)率為（88％），病例組與對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05。在病例組的組織學(xué)分型中高分化胃癌Ezrin蛋白的陽性表達(dá)率為（93.8％）；低分化胃癌中Ezrin蛋白的陽性表達(dá)率為（71.4％）；兩分型P<0.05，有差異。在病例組有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Bormann分型中的陽性表達(dá)的陽性率也有差異，P<0.05。
　　 CD44v6蛋白表

7、達(dá)在細(xì)胞膜，胃癌組織中的陽性表達(dá)率為（75％）；正常胃粘膜CD44v6蛋白陽性表達(dá)率為（51.2％）；轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)CD44V6蛋白陽性表達(dá)率為（78％），病例組與對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.05。在病例組的組織學(xué)分型中高分化胃癌CD44v6蛋白的陽性表達(dá)率為（81.6％）；低分化胃癌中CD44v6蛋白的陽性表達(dá)率為（65.7％）；兩分型P<0.05，有差異。在病例組有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中P<0.05。
　　 RT-PCR實(shí)驗(yàn)

8、結(jié)果，熒光定量結(jié)果根據(jù)△CT=（實(shí)驗(yàn)組-內(nèi)參組）-（對照組-內(nèi)參組）值大小來判斷胃癌組織中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的mRNA的表達(dá)量。結(jié)果顯示胃癌組織中Ezrin蛋白和CD44v6蛋白mRNA的表達(dá)明顯高于正常胃粘膜的對照組。
　　 結(jié) 論
　　 Ezrin蛋白和CD44v6蛋白的表達(dá)在胃癌組中明顯高于正常胃粘膜，提示Ezrin和CD44v6的表達(dá)可能參與了胃癌的生長過程。伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移胃癌組中Ezrin蛋白的表達(dá)