ISSR技術(shù)應(yīng)用于我國(guó)利什曼原蟲系統(tǒng)發(fā)生的研究.pdf

1、利什曼原蟲種類繁多，他們?cè)诹餍胁W(xué)、生物學(xué)及感染宿主的臨床癥狀等方面均存在差異。我國(guó)不僅存在能對(duì)人致病的嬰兒利什曼原蟲和杜氏利什曼原蟲，也存在僅感染動(dòng)物的利什曼原蟲種株，且其宿主和媒介亦具多樣性和交差性。同種利什曼原蟲不同地域分離株如嬰兒利什曼原蟲，可導(dǎo)致不同的臨床癥狀。因此，開(kāi)展對(duì)利什曼原蟲系統(tǒng)發(fā)生的研究不僅有助于利什曼病的分子流行病學(xué)研究，也有助于蟲株鑒定，對(duì)于選擇恰當(dāng)?shù)闹委煷胧┘爸贫ê线m的控制策略也非常必要。 本研究通過(guò)選

2、用21種單引物對(duì)30株有代表性的利什曼原蟲分離株進(jìn)行了簡(jiǎn)單重復(fù)序列間區(qū)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(ISSR-PCR)擴(kuò)增，經(jīng)非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳配合銀染方法獲得ISSR帶譜，共計(jì)866條多態(tài)性條帶，再根據(jù)蟲株間ISSR帶譜的相似程度和相異程度計(jì)算出Jaccard相似系數(shù)和Nei遺傳距離。在此基礎(chǔ)上分別構(gòu)建了UPGMA和Neighbour Joining系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)。結(jié)果表明這30株蟲株可聚類為6組：我國(guó)可致人利什曼病的蟲株與杜氏利什曼原蟲參照株“

3、DD8”為一組；嬰兒利什曼原蟲參照株“LEM”、碩大利什曼原蟲參照株“5AS”、熱帶利什曼原蟲參照株“K27”以及埃塞俄比亞利什曼原蟲參照株“L100”為一組；屬于Viannia亞屬的巴西利什曼原蟲參照株“2903”沒(méi)有與上述屬于利什曼亞屬的蟲株聚在一起，單獨(dú)為一組；都蘭利什曼原蟲參照株“3720”與我國(guó)新疆克拉瑪依和奇臺(tái)縣的以大沙鼠為宿主的都蘭利什曼原蟲分離株聚為一組；沙鼠利什曼原蟲參照株“GER”、新疆克拉瑪依白堿灘大沙鼠分離株“K

4、-7”和內(nèi)蒙古額濟(jì)納旗大沙鼠分離株“E154”聚為一組；內(nèi)蒙古額濟(jì)納旗的蜥蜴分離株“LIZ”、新疆克拉瑪依阿帕克司白蛉分離株“K-E”和一株甘肅內(nèi)臟利什曼病病人的分離株“LUO”為一組。此外，對(duì)蟲株的ISSR特征進(jìn)行了主成分分析。幾種方法的聚類結(jié)果與傳統(tǒng)的分類方法鑒定結(jié)果符合程度相當(dāng)高，表明此方法可用于蟲株的快速鑒定，本研究的結(jié)果顯示以前未被鑒定的分離株“K-E”、“Q-4"和“E154”分別為蜥蜴利什曼原蟲、都蘭利什曼原蟲和沙鼠利什曼