利什曼原蟲過氧化物酶的修飾及其多酶體系的研究.pdf

1、利什曼原蟲過氧化物酶(LmP)是一種以細胞色素C為底物需消耗H2O2的一種血紅素過氧化物酶。本課題從來源于Leishmania major strain Friedlin的LmP基因片段出發(fā)，構建了多個含有LmP基因片段的表達載體。
　　首先是通過分子生物學操作，構建了分別含有類彈性蛋白ELP標簽和小泛素相關修飾蛋白SUMO標簽的融合蛋白表達載體，探究了其性質的變化。通過Ni-NTA金屬螯合層析法對含有組氨酸標簽的三種蛋白完成了純

2、化工作，到達了理想的純度，含ELP標簽的蛋白用ITC法純化兩到三次便可達到理想效果。再對蛋白進行了圓二色譜和熒光光譜的表征，在加入H2O2后，結構變化最小的是加了ELP標簽的蛋白。再結合熒光光譜測出的Stern-Volmer方程KSV數值，用數字直接證明加了ELP標簽的LmP蛋白結構變化最小，說明ELP標簽對LmP蛋白構象有一定的穩(wěn)定作用。SUMO標簽的作用還是它的本職功能，助溶。同樣條件表達純化的LmP-SUMO和LmP，前者濃度是后

3、者10倍，SUMO標簽增溶效果強大。改造后的酶活并沒有受到負面影響，甚至催化速率有所提高。
　　高效多酶催化體系在生物領域被廣泛研究，深入研究及完善多酶催化體系具有很大的發(fā)展?jié)摿?。所以本文通過內含肽介導融合LmP和D-氨基酸氧化酶，建立LmP-DAAO復合酶催化體系。實驗證明，進一步提高了DAAO的酶活，DAAO可用于生產頭孢菌素類抗生素，這對DAAO在工業(yè)上的應用中具有一定的參考意義。最后，在體外直接混合LmP和5-羥甲基糠醛氧