p54nrb-NONO通過SREBP-1a調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝促進(jìn)乳腺癌增殖機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分、p54nrb/NONO通過SREBP-1a調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝促進(jìn)乳腺癌增殖機(jī)制的研究
　　目的:研究p54nrb/不含 POU結(jié)構(gòu)域的八聚核苷酸結(jié)合蛋白（non-POU-dormain-containing octamer-bindingprotein，NONO）通過膽固醇調(diào)節(jié)元件蛋白（Sterol regμlatory element-binding proteins-1a，SREBP-1a）調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，促進(jìn)乳腺癌增殖的分

2、子機(jī)制。
　　方法：應(yīng)用免疫組化檢測p54nrb/NONO和SREBP-1蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)情況，統(tǒng)計分析兩種蛋白表達(dá)在乳腺癌中的相關(guān)性。通過GST融合蛋白沉降技術(shù)（Glutathione-S-transferase-pull down，GST-pull down）、免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）和熒光共定位等分子生物學(xué)技術(shù)篩選并驗證p54nrb/NONO與SREBP-1a相互結(jié)合及其位點

3、，明確p54nrb/NONO蛋白表達(dá)變化在SREBP-1a蛋白功能變化中的作用；并分別通過體外細(xì)胞學(xué)實驗和體內(nèi)裸鼠成瘤實驗探討p54nrb/NONO與SREBP-1a相互作用在脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)及乳腺癌細(xì)胞增殖等生物學(xué)功能中的作用。
　　結(jié)果：核蛋白p54nrb/NONO在乳腺癌組織中比癌旁組織高表達(dá)，并和SREBP-1a蛋白水平正相關(guān)。p54nrb/NONO和SREBP-1a存在相互作用，其中Y267是p54nrb與SREBP-1a結(jié)

4、合的關(guān)鍵位點。p54nrb/NONO與核蛋白SREBP-1a結(jié)合增加了核蛋白SREBP-1a的穩(wěn)定性。在乳腺癌中，p54nrb/NONO促進(jìn) SREBP-1a介導(dǎo)的脂質(zhì)合成基因轉(zhuǎn)錄和脂質(zhì)產(chǎn)物生成，促進(jìn)體外乳腺癌細(xì)胞增殖和體內(nèi)乳腺癌腫瘤生長。
　　結(jié)論：p54nrb/NONO與SREBP-1a結(jié)合促進(jìn)了脂質(zhì)合成和乳腺癌腫瘤增殖。
　　第二部分、辛伐他汀調(diào)節(jié)p54nrb/NONO表達(dá)抑制乳腺癌細(xì)胞增殖
　　目的:探討p54

5、nrb/NONO表達(dá)在辛伐他汀抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：通過p54nrb/NONO基因的特異性小干擾RNA片段(siRNA-p54nrb)和p54nrb過表達(dá)質(zhì)粒（pcDNA4/TO-p54nrb）轉(zhuǎn)染技術(shù)分別建立低表達(dá)和高表達(dá)p54nrb/NONO乳腺癌MCF-7細(xì)胞株。應(yīng)用細(xì)胞計數(shù)方法分別檢測辛伐他汀作用后MCF-7乳腺癌細(xì)胞、低表達(dá)和高表達(dá)p54nrb/NONO MCF-7乳腺癌細(xì)胞株的增

6、殖情況。應(yīng)用實時熒光定量PCR和western blot分別檢測辛伐他汀作用后MCF-7乳腺癌細(xì)胞、低表達(dá)和高表達(dá)p54nrb/NONO MCF-7乳腺癌細(xì)胞株p54nrb的mRNA和蛋白的表達(dá)水平、HMGCR的mRNA水平和利用組織總膽固醇酶法測定膽固醇含量變化。
　　結(jié)果:siRNA-p54nrb轉(zhuǎn)染組MCF-7細(xì)胞中p54nrb mRNA及蛋白的表達(dá)水平顯著下降（p<0.01），過表達(dá)pcDNA4/TO-p54nrb組，p5

7、4nrb mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著升高（p<0.01）。辛伐他?。?0μM）有效地抑制MCF-7細(xì)胞增殖（p<0.05）；辛伐他汀作用MCF-7細(xì)胞后，p54nrb的mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低（p<0.05）；轉(zhuǎn)染siRNA-p54nrb下調(diào)p54nrb表達(dá)，MCF-7細(xì)胞增殖受到明顯抑制(p<0.05)，過表達(dá)p54nrb蛋白促進(jìn)了乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖(p<0.05)；MCF-7細(xì)胞中過表達(dá) p54nrb的同時聯(lián)合辛伐他汀作