ATRA誘導(dǎo)NB細(xì)胞分化及TrkB表達(dá)的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文ATRA誘導(dǎo)NB細(xì)胞分化及TrkB表達(dá)的研究姓名：佟海俠申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：兒科學(xué)指導(dǎo)教師：張錦華2000.4.13 7 “ C 水浴復(fù)蘇人N B 細(xì)胞系S M S —K C N R ，并立即放在含有l(wèi) s ％駘牛血清、1 0 0 I U ／m l 青霉素、1 0 0 p g ／m l 鏈霉素的R P M ] 1 6 4 0培養(yǎng)灌串，麓子3 7 “ C 、5 ％C o ：、l Q O ％濕度的二鬣億碳培養(yǎng)籍中

2、培養(yǎng)，每3 - 4 必?fù)Q液一次。當(dāng)細(xì)胞達(dá)到8 0 ％匯合狀態(tài)時(shí)做傳代處理。二、實(shí)駿分組l 、禱A , T R A 焉禿求乞簿配或1 0 “ 2 M ／L 縫儲(chǔ)存滾予一∞℃保存。使用時(shí)將A T R A 加入培養(yǎng)液申倍比稀釋成5 n M ( 5 ×t 0 。M ／L ) 及5 p M ( 5 ×1 0 一M ／L ) 。對(duì)照組用含0 ．1 ％v ／v 的無水穩(wěn)醇的培葵滾處理，驥實(shí)驗(yàn)證甓魏濃愛懿無零乙醇對(duì)N B 纓蕤皇長(zhǎng)無

3、暖顯影響。2 、將S M S —K c N R 細(xì)胞各分成3 組：含5 n M A T R A 的培養(yǎng)液處理靛實(shí)驗(yàn)A 組，含5 弘MA T R A 憋培養(yǎng)滾處理酶實(shí)驗(yàn)B 組及對(duì)照組。三、檢測(cè)指標(biāo)及方法1 、活繃胞計(jì)數(shù)取指數(shù)生長(zhǎng)絮纓穩(wěn)，接種至2 毒魏藉養(yǎng)板，繯耱濃度楚l ×1 0 5個(gè)／m l 。分別于A T R A 處理后2 、4 、6 天，用臺(tái)盤藍(lán)拒染計(jì)數(shù)活細(xì)胞。對(duì)照組朔兩實(shí)驗(yàn)級(jí)備設(shè)3 份閽樣標(biāo)本，每一標(biāo)本計(jì)數(shù)4 次，結(jié)祭浚

4、垮數(shù)±椽準(zhǔn)羞表暴。2 、細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察用作分化研究的細(xì)胞以l ×1 0 4 個(gè)／c m 2 數(shù)目接種予培養(yǎng)瓶竄。分舅l 在按藥處理茲及處理后2 、4 、s 天，霜倒麓耜差顯徽鏡鼴察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改交。N B 纘胞可有不妖子胞體的短的軸突，分化后的細(xì)胞有長(zhǎng)予胞體的軸突延伸。觀察時(shí)對(duì)每瓶細(xì)胞選取5 個(gè)不同視野的2 0 0 個(gè)纓貔，計(jì)算綱胞分化百分率。結(jié)果以均數(shù)±撼準(zhǔn)差表示。3 、T r k Bm R N A 襲達(dá)的