MiR-146a在全反式維甲酸誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化中的作用.pdf

1、目的和意義：檢測(cè)全反式維甲酸（ATRA）誘導(dǎo)急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）細(xì)胞株NB4細(xì)胞分化前后miRNA 表達(dá)譜的變化，并利用生物信息學(xué)方法對(duì)其靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，選出和細(xì)胞增殖分化相關(guān)的miRNA，并進(jìn)行功能研究，進(jìn)而探討miRNA 在APL細(xì)胞分化中的作用。 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果： 第一部分，通過miRNA基因芯片檢測(cè)ATRA誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化前后各時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)譜差異，利用miRNA數(shù)據(jù)庫預(yù)測(cè)篩選誘導(dǎo)分化中變化的miRNA

2、的靶基因。然后找出其中和增殖分化潛在相關(guān)的miRNA，并用TaqMan real-time PCR技術(shù)驗(yàn)證其表達(dá)。miRNA芯片結(jié)果顯示：在ATRA誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化后，表達(dá)顯著上調(diào)的miRNA有8個(gè)，顯著下調(diào)的有15個(gè)。其中miR-146a在ATRA處理NB4細(xì)胞后表達(dá)量逐漸降低，而其潛在靶基因Smad4 mRNA和蛋白（TGF-β1/Smad信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中公共調(diào)節(jié)型Smad）的表達(dá)呈逐漸上升趨勢(shì)。 第二部分，利用DNA重組技

3、術(shù)構(gòu)建miR-146a表達(dá)質(zhì)粒及含Smad43’UTR中miR-146a互補(bǔ)結(jié)合位點(diǎn)的報(bào)告基因重組質(zhì)粒，與內(nèi)參質(zhì)粒pRL-TK共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，測(cè)定相對(duì)熒光素酶活性，分析miR-146a和其潛在靶基因Smad4之間的作用關(guān)系。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)組相對(duì)熒光素酶活性明顯低于對(duì)照組，下降30.72％。miR-146a可抑制Smad4的轉(zhuǎn)錄激活，降低Smad4蛋白的表達(dá)。 結(jié)論：miRNA在全反式維甲酸誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化的信號(hào)傳導(dǎo)