冠心病發(fā)病危險(xiǎn)性及其預(yù)后的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病不論在發(fā)達(dá)國家還是發(fā)展中國家都是21世紀(jì)威脅人類健康的主要疾病之一。而我國由于生活方式改變和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，冠心病的發(fā)病率與死亡率呈不斷增高的趨勢，嚴(yán)重威脅人民生命健康安全。冠心病是由遺傳和環(huán)境共同作用的結(jié)果，其確切的發(fā)病原因目前尚不明確。吸煙、脂代謝異常、高血壓、糖尿病等公認(rèn)危險(xiǎn)因素與冠心病發(fā)病密切相關(guān)，但是這些危險(xiǎn)因素不能全部解釋哪些個(gè)體發(fā)生急性冠脈事件的發(fā)生率高。隨著對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致冠心病機(jī)制的深入研究，發(fā)現(xiàn)

2、炎癥和相關(guān)基因在動(dòng)脈粥樣硬化的形成和發(fā)展中起重要作用。白細(xì)胞總數(shù)和超敏C反應(yīng)蛋白（hsCRP）是最廣泛使用的炎癥評(píng)價(jià)指標(biāo)，但相關(guān)的流行病學(xué)研究以歐美人群為主，在中國人群中上述指標(biāo)與冠心病發(fā)病危險(xiǎn)性和預(yù)后關(guān)系的研究較少。近十余年來隨著冠脈介入技術(shù)的不斷發(fā)展，接受新技術(shù)治療的冠心病患者預(yù)后與上述炎癥指標(biāo)的關(guān)系也需進(jìn)一步研究?；|(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）能夠降解所有的細(xì)胞外蛋白，其在血管和心肌組織中表達(dá)的改變?cè)谛难芗膊∪鐒?dòng)脈粥樣硬化、介入治療

3、術(shù)后再狹窄和心功能不全等疾病的發(fā)生中起重要作用；晚期糖基化終產(chǎn)物（AGEs）與糖基化終產(chǎn)物受體（RAGE）相互作用可能是內(nèi)皮細(xì)胞的主要促炎機(jī)制，RAGE表達(dá)異常與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)。而MMP-9和RAGE功能性單核苷酸多態(tài)性（SNPs）的多態(tài)改變可影響該基因的功能與表達(dá)。因此，上述基因某些功能性多態(tài)性位點(diǎn)可能與冠心病的遺傳易感性有關(guān)。
　　 為驗(yàn)證上述假說，本研究應(yīng)用病例對(duì)照和隊(duì)列研究方法，評(píng)價(jià)白細(xì)胞總數(shù)及其分類計(jì)數(shù)、hsCRP水

4、平及MMP-9、RAGE基因潛在的功能性SNPs位點(diǎn)的多態(tài)改變與冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)性和預(yù)后的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)我國南方漢族人群冠心病的危險(xiǎn)基因型或其它表型生物標(biāo)記物，以期在將來能夠用于篩選高危人群或易感個(gè)體。
　　 本研究在中國南方城市漢族人群中進(jìn)行病例對(duì)照研究，探討白細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù)與冠心病發(fā)病危險(xiǎn)性的關(guān)系；采用隊(duì)列研究評(píng)價(jià)hsCRP、白細(xì)胞總數(shù)和分類計(jì)數(shù)與冠心病患者預(yù)后的關(guān)系。
　　 病例對(duì)照研究提示白細(xì)胞總數(shù)及其分類計(jì)數(shù)在

5、冠心病患者中均明顯高于對(duì)照人群。多因素Logistic回歸分析提示，與細(xì)胞數(shù)正常組相比，白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)和單核細(xì)胞數(shù)明顯升高組、淋巴細(xì)胞數(shù)明顯降低組冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)均顯著升高，冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)分別增加了1.73倍、1.73倍、4.93倍和1.94倍。采用逐步Logistic回歸分析方法，除傳統(tǒng)危險(xiǎn)因素外，單核細(xì)胞數(shù)升高與冠心病發(fā)病危險(xiǎn)性增加有關(guān)，與單核細(xì)胞計(jì)數(shù)正常組相比，單核細(xì)胞數(shù)升高組的冠心病發(fā)病危險(xiǎn)性升高1.71倍（95％CI=

6、1.19-2.46，P=0.004），明顯升高組冠心病發(fā)病危險(xiǎn)性升高4.51倍（95％CI=3.19-6.38，P=0.004）。按不同冠心病類型分層后，發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞計(jì)數(shù)升高也能顯著增加穩(wěn)定型心絞痛發(fā)病危險(xiǎn)性，與單核細(xì)胞計(jì)數(shù)正常組相比，升高組和明顯升高組穩(wěn)定型心絞痛發(fā)病危險(xiǎn)性升高2.07倍（95％CI=1.27-3.36，P=0.003）和3.47倍（95％CI=2.09-5.77，P<0.001），對(duì)急性冠脈綜合征的發(fā)病危險(xiǎn)性亦得出類

7、似的結(jié)論。隊(duì)列研究提示hsCRP與冠狀動(dòng)脈病變累及血管支數(shù)有關(guān)，血管病變支數(shù)越多則hsCRP水平越高，白細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)與病變血管的數(shù)目無明確關(guān)系。在2年隨訪過程中發(fā)生心血管事件包括心血管死亡和其它非致死性心血管事件患者的hsCRP水平、白細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)中除淋巴細(xì)胞數(shù)外均明顯高于未發(fā)生心血管事件的患者。根據(jù)入選病例在隨訪的不同時(shí)間段發(fā)生心血管事件的分析亦得出相似的結(jié)論。Cox逐步回歸分析顯示，除傳統(tǒng)因素外，hsCRP和中性粒細(xì)胞數(shù)

8、與冠心病預(yù)后有關(guān)。研究結(jié)果表明白細(xì)胞總數(shù)及分類計(jì)數(shù)、hsCRP在冠心病的發(fā)病和預(yù)后中其重要作用。
　　 第二部分
　　 MMP-9功能性單核苷酸多態(tài)性與冠心病遺傳易感性關(guān)系的病例對(duì)照研究
　　 MMP-9在血管重塑和動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)展中起重要作用。研究表明MMP-9某些功能性多態(tài)性位點(diǎn)的多態(tài)改變可能與冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)性有關(guān)。本研究通過大樣本的病例對(duì)照研究，探討MMP-9啟動(dòng)子區(qū)的-1562 C>T多態(tài)性位點(diǎn)和R

9、279Q，P574R和R668Q三個(gè)外顯子區(qū)多態(tài)性位點(diǎn)的多態(tài)改變與中國人群冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)性是否有關(guān)。
　　 本次研究對(duì)象為經(jīng)冠脈造影證實(shí)的冠心病患者762例和555例健康對(duì)照，研究結(jié)果顯示，MMP-9-1562 C>T，R279Q，P574R和R668Q多態(tài)性位點(diǎn)的變異等位基因在病例中的頻率分別為0.118、0，284、0.273和0.142；在對(duì)照中的頻率則分別為0.105、0.315、0.289和0.156，各位點(diǎn)等位基因

10、頻率的分布在病例和對(duì)照間的分布均無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。MMP-9 R279Q，P574R和R668Q位點(diǎn)的變異基因型在冠心病的發(fā)病中均表現(xiàn)有一定的保護(hù)作用，三個(gè)位點(diǎn)均含變異等位基因的聯(lián)合基因型引起冠心病的OR值為0.52（95％CI=0.31-0.87，P=0.013），經(jīng)Bonfferoni調(diào)整后，P值仍表現(xiàn)有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.017），分層分析顯示，該聯(lián)合基因型的保護(hù)作用在無糖尿病和有吸煙史的人群更為明顯。本次研究未發(fā)現(xiàn)MMP

11、-9-1562 C>T位點(diǎn)的多態(tài)改變?cè)诠谛牟〉陌l(fā)病中存在主效應(yīng)，但分層分析顯示，與野生純合子CC基因型相比，CT/TT變異基因型在糖尿病中可提高冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)性2.53倍，差異具有達(dá)到了統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性水平（95％CI=1.18-5.45，P=0.018），同時(shí)本研究還發(fā)現(xiàn)-1562 C>T位點(diǎn)的變異基因型可引起冠心病人發(fā)生心肌梗死（MI）的危險(xiǎn)性顯著升高。
　　 第三部分
　　 糖基化終產(chǎn)物受體基因功能性多態(tài)性與冠心病遺

12、傳易感性關(guān)系的病例對(duì)照研究
　　 RAGE和AGEs相互作用可促使動(dòng)脈粥樣硬化病變的進(jìn)展。RAGE基因某些功能性多態(tài)性位點(diǎn)的多態(tài)改變可導(dǎo)致該基因轉(zhuǎn)錄水平增加和促炎作用增強(qiáng)，RAGE基因啟動(dòng)子區(qū)的-429T/C，-374T/A及外顯子區(qū)引起氨基酸改變的Gly82Ser多態(tài)性可能與中國人群冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)性有關(guān)。
　　 為驗(yàn)證上述假設(shè)，本研究通過冠心病病例對(duì)照研究（707例病例和422例對(duì)照），對(duì)RAGE基因啟動(dòng)子區(qū)的-42

13、9T/C，.374T/A及外顯子區(qū)Gly82Ser多態(tài)性與中國人群冠心病遺傳易感性的關(guān)系進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，Gly82Ser多態(tài)性位點(diǎn)三種基因型頻率分布在病例和對(duì)照間的存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.008），采用顯性模型將變異型雜合子和變異型純合子合并后發(fā)現(xiàn)Gly82Ser變異基因型與冠心病的發(fā)病危險(xiǎn)性有關(guān)（調(diào)整OR=1.43，95％CI=1.08-1.90，P=0.014）。分層分析顯示含Gly82Ser變異等位基因引起冠心病危險(xiǎn)性升