開口箭皂苷提取優(yōu)化及其對關(guān)節(jié)炎小鼠的治療研究.pdf

1、百合科鈴蘭族開口箭屬開口箭中含有多種生物活性成分，這些生物活性成分都具有許多生物功能，其中最主要的成分是甾體皂苷，甾體皂苷已被證明具有抗炎、抗腫瘤、祛痰和鎮(zhèn)痛等多種作用。因此對皂苷的提取方法進行探討優(yōu)化，獲取最佳提取工藝是很有意義的。然而皂苷的提取方法仍不夠完善，需要進一步進行探索，本實驗就采用了多種處理方法相結(jié)合的方式探討了皂苷的最佳獲取工藝，為皂苷的提取優(yōu)化提供了參考。
　　類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎屬于疑難雜癥之一，西藥治療該疾病存在著

2、成本高、副作用大等缺點，中藥治療就逐漸成為人們關(guān)注的焦點。開口箭中的皂苷在抗炎方面也具有相應(yīng)的療效，本實驗就研究了用我們所探討的最佳皂苷提取工藝所獲取的皂苷對關(guān)節(jié)炎小鼠的治療效果。該研究為開口箭皂苷在關(guān)節(jié)炎癥治療方面打下了鋪墊，為開口箭皂苷最終應(yīng)用于人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療奠定了基礎(chǔ)。
　　本研究先用物理和化學(xué)方法鑒定了開口箭的主要生物活性成分，得知開口箭中含有甾體皂苷、黃酮類物質(zhì)、生物堿和揮發(fā)油類成分，而不含酚類和鞣質(zhì)以及蒽醌類

3、物質(zhì)。
　　隨后又對開口箭皂苷的提取方法進行了探討。實驗首先分別用雙蒸水(DDW)溶解開口箭粉末或95％乙醇溶解開口箭粉末，然后又用電磁爐加熱法、微波爐加熱法或超聲波破碎法對開口箭溶解液進行處理，接著用石油醚萃取法或乙醚萃取法進行脫脂萃取，最后都用水飽和正丁醇進行深度萃取，從而獲得開口箭總皂苷成分，然后觀察、分析和比較了這幾種方法的提取效率。實驗結(jié)果顯示:DDW溶解開口箭粉末比95％乙醇溶解開口箭粉末獲取的總皂苷含量多，微波爐加熱

4、比超聲波破碎最終獲得的總皂苷含量多，超聲波破碎比電磁爐加熱獲取的總皂苷含量多。石油醚萃取比乙醚萃取效果好。由此表明最佳提取工藝為:用DDW溶解開口箭粉末，用微波爐加熱處理開口箭水溶液，用石油醚進行脫脂萃取，最后用水飽和正丁醇再次萃取。
　　本研究最后用第三章優(yōu)化的皂苷提取流程所提取的皂苷研究了其對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎小鼠的治療效果。實驗設(shè)有正常組、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型組和開口箭皂苷治療組，實驗開始成功用雞蛋清卵蛋白初次免疫，隨后又用弗式不

5、完全佐劑乳化的雞蛋清卵蛋白再次免疫建立起了關(guān)節(jié)炎模型，隨后又用開口箭皂苷溶液進行灌胃處理，濃度為0.3 g/mL，劑量為20 mL/kg，一天一次，連續(xù)進行兩周，期間對小鼠的形態(tài)進行了觀察，并在治療后測量、比較和分析了不同組小鼠后爪的體積，最后對3組小鼠的關(guān)節(jié)部位進行蘇木精-伊紅染色(HE)和抗TNFα免疫組化(IHC)實驗研究。實驗結(jié)果表明，關(guān)節(jié)炎小鼠表現(xiàn)出入類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的相關(guān)癥狀，如:爪子腫脹、畸形和活動能力減弱等，關(guān)節(jié)炎組小鼠

6、后爪的體積與正常組小鼠相比有極顯著統(tǒng)計學(xué)差異，開口箭皂苷治療組小鼠與關(guān)節(jié)炎小鼠后爪體積相比有極顯著統(tǒng)計學(xué)差異。HE實驗表明，開口箭皂苷治療后的小鼠滑膜增生明顯減輕，關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)接近正常。IHC實驗表明經(jīng)開口箭皂苷治療后的小鼠滑膜顏色比關(guān)節(jié)炎小鼠顏色淺，TNFα的含量比關(guān)節(jié)炎小鼠低。以上研究為開口箭皂苷對小鼠關(guān)節(jié)炎的治療提供了參考，并為進一步深入研究打下了鋪墊。
　　綜上所述:開口箭中含有多種生物活性成分，例如:甾體皂苷、黃酮類物質(zhì)、生