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文檔簡介
1、目的:利用環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)快速檢測日本血吸蟲(Schistosoma japonicum)感染性釘螺、卡氏肺孢子蟲(Pneumocystis carinii)、惡性瘧原蟲(Plasmodium falciparum)的研究。
方法:以日本血吸蟲、卡氏肺孢子蟲、惡性瘧原蟲的特異基因為靶序列,利用Primer Explorer V3軟件分別
2、設(shè)計擴增靶基因的4條LAMP引物,酚氯仿法分別提取三種病原體的DNA,取適量模板DNA加入配制并優(yōu)化好的LAMP反應(yīng)體系,65℃下60 min,完成對靶病原體基因的擴增,通過肉眼觀察、SYBR Green I染色及電泳來判定擴增結(jié)果。LAMP擴增產(chǎn)物經(jīng)酶切進一步鑒定;設(shè)立對照組評價特異性;10倍系列稀釋模板檢測LAMP敏感性。
結(jié)果:模板經(jīng)LAMP擴增后,肉眼、SYBR Green I染色和電泳均能觀察到LAMP擴增產(chǎn)物的出現(xiàn)
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