卡氏肺孢子蟲生長發(fā)育的觀察研究.pdf

1、目的：觀察Wistar大鼠肺組織中卡氏肺孢子蟲的生長發(fā)育和形態(tài)結(jié)構(gòu)。 方法：通過皮下注射地塞米松磷酸鈉建立Wistar大鼠卡氏肺孢子蟲肺炎動物模型為實驗組，另設(shè)不注射藥物為對照組。制備大鼠肺印片標本，瑞-姬氏染色，光學(xué)顯微鏡下檢測和觀察卡氏肺孢子蟲。取大鼠肺組織標本，制備肺組織切片和透射、掃描電鏡觀察標本，分別使用光鏡、透射和掃描電鏡觀察該蟲生長發(fā)育、形態(tài)結(jié)構(gòu)及其感染大鼠肺病理學(xué)變化。用數(shù)字圖像分析技術(shù)，對卡氏肺孢子蟲包囊進行形

2、態(tài)學(xué)參數(shù)測定。 結(jié)果：肺印片標本經(jīng)瑞-姬氏染色，光學(xué)顯微鏡油鏡下檢測，可見清晰卡氏肺孢子蟲包囊和滋養(yǎng)體，以肺泡內(nèi)多見，偶可在細胞內(nèi)見到。對照組大鼠未檢測到該蟲。實驗組大鼠肺印片標本該蟲檢出率為57％，第4～5周查到包囊為主，7～8周后以滋養(yǎng)體為主。掃描電鏡觀察，卡氏腫孢子蟲有表面光滑和粗糙兩種類型，其中粗糙型又有微絨毛、管狀結(jié)構(gòu)、顆粒樣物三種情況；觀察到壁上有凹陷、正在脫囊及伸出偽足的蟲體。透射電鏡觀察到卡氏肺孢子蟲有滋養(yǎng)體、囊

3、前期和包囊三個發(fā)育階段。滋養(yǎng)體多附著于肺Ⅰ型上皮細胞，偶見附著于肺Ⅱ型上皮細胞，有的伸出1或多個較寬大偽足，部分細胞質(zhì)內(nèi)發(fā)現(xiàn)核相關(guān)細胞器和紡錘微管。囊前期有早、中、晚三種類型，在其內(nèi)發(fā)現(xiàn)有代表減數(shù)分裂的聯(lián)會復(fù)合體。包囊壁上有一增厚處，內(nèi)有一孔隙。第10周實驗組大鼠肺間隔及氣管中可見到卡氏腫孢子蟲。用數(shù)字圖像處理技術(shù)測量卡氏肺孢子蟲包囊長徑、短徑、投影面積、體積、周長、等效直徑和圓球度數(shù)值均數(shù)分別為：4.8159μm，3.6923μm，1

4、3.07μm2，36.76μm3，14.291μm，4.03μm和0.8。光鏡觀察HE染色的肺組織切片，第7～8周實驗組大鼠肺泡內(nèi)被大量蟲體和滲出物充滿，肺Ⅱ型上皮細胞脫落，肺泡隔增厚。掃描電鏡觀察肺內(nèi)有卡氏肺孢子蟲，肺組織呈纖維性改變。透射電鏡觀察，肺Ⅱ型上皮細胞質(zhì)內(nèi)可見許多空泡和電子密度高的顆粒。含蟲體的肺Ⅱ型上皮細胞表膜突出，形成質(zhì)膜小泡，細胞核膜內(nèi)陷，核內(nèi)染色體呈絲狀并繞成團。 結(jié)論：瑞-姬氏復(fù)染法檢測卡氏肺孢子蟲，操作