胃癌中microRNA-1228-的表達(dá)及其功能機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 miRNA是一類內(nèi)源性的長度約20-23nt的單鏈小RNA，通過介導(dǎo)靶基因的翻譯抑制或降解發(fā)揮作用，差異表達(dá)miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。世界范圍內(nèi)胃癌的發(fā)病率排在腫瘤中第四位，在腫瘤相關(guān)死因中排在第二位。雖然胃癌的治療手段已經(jīng)取得很大進(jìn)步，但是預(yù)后仍然沒有明顯改善。本研究的目的是觀察miR-1228*在胃癌中的作用并探討其機(jī)制。
　　 方法：
　　 采用實時定量PCR檢測50例胃癌及癌旁

2、組織的miR-1228*表達(dá)，并進(jìn)一步分析miR-1228*與臨床病理特征之間的相關(guān)性。為了評價miR-1228*在胃癌中的作用，建立了穩(wěn)定過表達(dá)miR-1228*的細(xì)胞系，并觀察miR-1228*對裸鼠皮下移植瘤的形成及生長狀況的影響，構(gòu)建miR-1228*啟動子區(qū)熒光報告基因質(zhì)粒pGL3-1228*-promoter，轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞，加入TNF-α干預(yù)，檢測熒光變化情況。進(jìn)一步將c-Rel表達(dá)質(zhì)粒和pGL3-1228*-promote

3、r共轉(zhuǎn)染，觀察報告基因的轉(zhuǎn)錄活性。采用報告基因檢測miR-1228*穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的NF-κB轉(zhuǎn)錄活性。Westernblot檢測miR-1228*穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株E-cadherin和Vimentin的表達(dá)情況。采用transwell實驗方法觀察miR-1228*對SGC-7901遷移的影響。
　　 結(jié)果：
　　 相對于癌旁組織，miR-1228*的表達(dá)水平在胃癌組織中明顯下調(diào)；并且miR-1228*的表達(dá)水平和腫瘤大小相關(guān)。與

4、陰性對照相比，miR-1228*過表達(dá)能明顯抑制SGC-7901裸鼠皮下移植瘤的生長，并減低瘤體的重量。NF-κB的激活劑TNF-α能夠抑制miR-1228*啟動子區(qū)報告基因的熒光強(qiáng)度；NF-κB亞基c-Rel的表達(dá)質(zhì)粒和pGL3-1228*-promoter共轉(zhuǎn)染至SGC-7901，結(jié)果發(fā)現(xiàn)pGL3-1228*-promoter的表達(dá)活性明顯受到抑制，抑制的程度大于TNF-α。進(jìn)一步研究結(jié)果顯示，miR-1228*穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的NF

5、-κB轉(zhuǎn)錄活性明顯降低。miR-1228*能明顯上調(diào)SGC-7901的E-cadherin蛋白的表達(dá)，同時下調(diào)Vimentin的蛋白水平。Transwell實驗結(jié)果顯示，miR-1228*可以明顯抑制SGC-7901的遷移。
　　 結(jié)論：
　　 miR-1228*在胃癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織。過表達(dá)miR-1228*能夠抑制SGC-7901裸鼠皮下移植瘤的生長。miR-1228*與NF-κB之間存在反饋環(huán)路。過表達(dá)