系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者CD4+T細(xì)胞IL-10和IL-13基因調(diào)控序列甲基化狀態(tài)研究.pdf

1、目的：DNA甲基化異常在系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupuserythematosus，SLE)發(fā)病中發(fā)揮重要作用，而白介素(Interleukin，IL)IL-10和IL-13在SLE病人自身抗體的產(chǎn)生以及Th2細(xì)胞分化中起重要作用。然而，導(dǎo)致SLE患者IL-10和IL-13過(guò)度表達(dá)的機(jī)制并不清楚。本研究主要探討SLE患者CD4+T細(xì)胞中IL-10和IL-13基因調(diào)控序列的甲基化狀態(tài)及其過(guò)度表達(dá)的機(jī)制。
　　 方法：密

2、度梯度離心法分離正常人、SLE患者外周血單個(gè)核細(xì)胞，用免疫磁珠分離外周血細(xì)胞CD4+T細(xì)胞，加入1μM甲基化抑制劑5-氮雜胞甙(5-azaC)，在RPMI1640/10％FCS/IL-2中孵育至少72h。實(shí)時(shí)定量RT-PCR(real-time RT-PCR)檢測(cè)CIM+T細(xì)胞中IL-10和IL-13的mRNA表達(dá)水平；酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISAs)檢測(cè)血清中IL-10和IL-13的蛋白水平；亞硫酸氫鈉測(cè)序法檢測(cè)IL-10和IL-13

3、基因調(diào)控區(qū)域的甲基化狀態(tài)。
　　 結(jié)果：與正常對(duì)照組相比，SLE患者CD4+T細(xì)胞IL-10和IL-13mRNA水平顯著升高(IL-10：P=0.001；IL-13：P=0.012)；ELISA結(jié)果顯示SLE患者血清中IL-10和IL-13的蛋白水平顯著增加(IL-10：P=0.005；IL-13：P-0.007)；亞硫酸氫鈉測(cè)序結(jié)果表明SLE CD4+T細(xì)胞IL-10和IL-13基因調(diào)控區(qū)域的DNA甲基化水平顯著降低(IL-1

4、0：P=0.036；IL-13：P=0.006)，并且分別與IL-10和IL-13的mRNA表達(dá)呈顯著負(fù)相關(guān)(IL-10：p=0.04；IL-13：P=0.006)；DNA甲基化抑制劑5-azacytidine(5-azaC)處理正常CD4+T細(xì)胞可增加IL-10和IL-13基因mRNA表達(dá)(IL-10：p=0.017；IL-13：p=：0.025)。
　　 結(jié)論：DNA甲基化參與調(diào)控SLE患者CD4+T細(xì)胞中IL-10和IL-