BPI蛋白在雄性小鼠生殖系統(tǒng)的表達(dá)特性及其在精卵融合過(guò)程中的功能.pdf

1、殺菌滲透增強(qiáng)蛋白(Bactericidal permeability increasing protein，BPI)是一種有很強(qiáng)抗革蘭陰性菌(GNB)活性的陽(yáng)離子蛋白，具有防御感染的作用。BPI最早從人中性粒細(xì)胞的嗜苯胺藍(lán)顆粒分離。BPI抑制或者殺死革蘭陰性菌主要通過(guò)以下兩條途徑：（1）與細(xì)菌細(xì)胞壁上脂多糖的脂質(zhì)A特異結(jié)合，從而改變細(xì)胞壁的通透性；（2）中和細(xì)菌內(nèi)毒素。在正常情況下，小鼠睪丸與附睪被檢測(cè)到高水平的BPI表達(dá)，提示BPI除

2、了抗菌作用外，亦有可能在生殖活動(dòng)中扮演某種角色。本研究旨在揭示BPI在小鼠睪丸與附睪的表達(dá)特性。利用制備的抗BPI-C多克隆抗體，重點(diǎn)觀察BPI在附睪表達(dá)的區(qū)域特異性。在了解BPI表達(dá)規(guī)律的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探討其表達(dá)的調(diào)控機(jī)制，及其在生殖活動(dòng)中的可能作用。
　　首先，RT-PCR發(fā)現(xiàn)BPI的 mRNA在小鼠睪丸與附睪呈高水平表達(dá)，并且，BPI的轉(zhuǎn)錄子(transcripts)在附睪中只表達(dá)于附睪頭部，而在前列腺、精囊腺和凝固腺未見(jiàn)表

3、達(dá)。其次，我們經(jīng)原核重組表達(dá)、親和層析純化了BPI-C端蛋白，并獲得抗BPI-C兔多克隆抗體。以該抗體為一抗，經(jīng)免疫免疫熒光化學(xué)法染色后發(fā)現(xiàn)，BPI表達(dá)在睪丸晚期生精細(xì)胞、精子、間質(zhì)細(xì)胞(Leydig cells)、附睪頭部上皮及管腔、睪丸輸出小管，并可附著在附睪精子頭部頂體區(qū)質(zhì)膜及頂體內(nèi)。雄激素調(diào)控BPI表達(dá)的體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，BPI的轉(zhuǎn)錄與翻譯表達(dá)水平都與雄激素具有顯著相關(guān)性。最后，我們進(jìn)行了小鼠體外穿卵實(shí)驗(yàn)，結(jié)果提示小鼠精子頂