艾迪注射液聯(lián)合小劑量化療治療食管鱗狀細胞癌的實驗及臨床研究.pdf

1、食管癌(Esophageal carcinoma)是我國最為常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率、死亡率分別列在全國十大惡性腫瘤的第5位、第4位，根據(jù)我國“2012中國腫瘤登記年報”中的數(shù)據(jù)顯示中原地區(qū)如河南、河北等正是我國食管癌的高發(fā)地區(qū)[1]。與此同時，流行病學資料顯示，我國食管癌的發(fā)病率及死亡率農(nóng)村地區(qū)遠高于城市地區(qū)，男性比例均遠高于女性，且中年以后食管癌的發(fā)病率以及死亡率逐步提高，不僅如此，就診時大部分食管癌患者已處于癌癥的中晚期，預后極其

2、不佳[2]。近些年來，食管癌新輔助化療方案的在臨床上得到廣泛應用，并較單純手術(shù)切除治療療效更勝一籌。盡管臨床各類一線化療藥物均對食管癌細胞擁有較顯著的殺傷作用，但是，由于我國的食管癌細胞大多為分化程度差異較大的鱗癌細胞[3]，與西歐國家以食管腺癌多見所不同，因而容易對順鉑、紫杉醇、5-氟尿嘧啶等一線化療藥物的敏感不是很高，且長期或大劑量使用化療藥物后，常常對正常組織造成不可逆性毒副作用，產(chǎn)生例如骨髓、胃腸道、免疫等諸多方面的不良反應，進

3、而使得部分腫瘤患者生活質(zhì)量發(fā)生下降，甚至會因此導致治療療程的中斷最終導致化療耐藥的發(fā)生，更甚者，會造成一些患者死于化療藥對正常組織的毒副作用而并非食管癌的原發(fā)病[4]。怎樣克服食管癌患者治療過程中極易發(fā)生的多藥耐藥，并在不減弱抗腫瘤效果的同時降低化療藥物對食管癌患者的毒副作用已成為食管癌化療過程中迫切需要解決的問題[5]。
　　艾迪注射液是我們獨特的中藥復方制劑，其與化療藥物聯(lián)合應用可達到降低毒性，提高療效的目的[6]，其作用機制

4、是值得探討的。因此，我們將不同劑量的艾迪配合10g·L-1順鉑應用于食管癌Eca-109細胞系，以調(diào)查艾迪注射液能否增強順鉑對食管癌Eca-109細胞株的細胞毒性，并檢測與凋亡密切相關(guān)的基因Bcl-xl\Bax mRNA的變化情況，為食管癌的聯(lián)合治療的最佳模式提供理論依據(jù)，探索二者發(fā)揮協(xié)同抗腫瘤效應的有關(guān)作用機制。
　　目的:
　　研究與探討中藥制劑艾迪注射液聯(lián)合小劑量化療對食管癌化療的增效作用及其相關(guān)作用機制。
　　

5、方法:
　　1.實驗研究
　　以不同濃度艾迪、順鉑10g·L-1及兩藥聯(lián)合作用于食管癌Eca-109細胞株。采用MTT法來檢測不同濃度艾迪與DDP單獨或聯(lián)合應用對食管癌Eca-109細胞的增殖抑制率，采用熒光染料Hoechst33342來檢測細胞形態(tài)學改變，采用Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞儀來分析凋亡細胞所占比例，采用RT-PCR方法來分析凋亡相關(guān)基因Bcl-xl、Bax mRNA的表達的變化。
　　

6、2.臨床研究
　　將86例食管鱗狀細胞癌患者隨機分為觀察組（44例）和對照組(42例)，對照組用常規(guī)劑量PF方案化療。觀察組44例在小劑量化療（化療方案同對照組，劑量為常規(guī)劑量的80％）同時聯(lián)用艾迪注射液。治療2個周期后，比較兩組患者的近期療效的差異、癥狀改善的差異、生活質(zhì)量變化的差異以及化療毒性輕重程度的差別。
　　結(jié)果:
　　1.實驗研究結(jié)果
　　1.1順鉑、艾迪單用或聯(lián)合使用對Eca-109細胞增殖抑制率的

7、影響
　　MTT實驗結(jié)果顯示單用順鉑組對Eca-109細胞的增殖抑制率分別為37.542±0.253％、52.785±0.516％、69.952±8.236％，單用艾迪組對Eca-109細胞的增殖抑制率分別為8.571±0.375％、16.214±1.375％、29.431±0.794％，艾迪與順鉑合用組對對Eca-109細胞的增殖抑制率分別為54.360±0.486％、56.516±0.379％、63.378±0.263％、59

8、.070±7.151％、62.182±1.029％、66.357±7.317％、73.057±0.631％、73.586±0.158％、76.824±0.251％。
　　1.2順鉑、艾迪單用或聯(lián)合使用對Eca-109細胞凋亡形態(tài)學改變的影響
　　空白對照組細胞株的細胞核為圓形或橢圓形細胞核，大小均勻，染色質(zhì)分布較均勻，在紫外光下透出藍色熒光。順鉑單用組、艾迪單用組以及順鉑艾迪聯(lián)合處理組的細胞株顯示出比空白對照組更強的藍色顆粒

9、狀熒光，細胞形態(tài)改變顯著，可表現(xiàn)出各種不同程度的收縮、變形，且細胞質(zhì)濃縮、細胞核染色質(zhì)凝集、核固縮、部分核碎裂和較明顯的凋亡小體，隨著藥物使用劑量的遞增，這樣的細胞的數(shù)量也隨之逐漸增多。
　　1.3順鉑、艾迪單用或聯(lián)合使用對Eca-109細胞凋亡百分率的影響
　　實驗結(jié)果顯示，細胞凋亡百分比從A組到G組依次為(0.53±0.16)％、(0.79±0.11)％、(1.16±0.95)％、(1.26±0.17)％、(1.43±0

10、.25)％、(2.47±0.33)％、(5.31±0.21)％、(5.79±0.27)％。我們發(fā)現(xiàn)，在逐漸增加艾迪濃度的條件下，早期凋亡細胞的比例也隨之增多，表明艾迪是以劑量依賴的方式促進食管癌細胞發(fā)生凋亡，且當艾迪濃度增加到一定程度時，細胞凋亡百分率改變有顯著統(tǒng)計學差異（P＜0.01）;將順鉑10g·L-1與不同濃度艾迪聯(lián)合應用時所誘導的凋亡率與僅用10g·L-1順鉑所誘導的凋亡率相比，可以發(fā)現(xiàn)當順鉑濃度一定時，可以通過增加艾迪的使用

11、劑量來增加食管癌細胞的凋亡率，與此同時，隨著艾迪使用劑量的增加，壞死細胞呈現(xiàn)出進行性增多的趨勢。
　　1.4順鉑、艾迪單用或聯(lián)合使用對Eca-109細胞Bax、Bcl-xlmRNA表達含量改變的作用
　　實驗結(jié)果如下，與空白對照組比較，各組均具有統(tǒng)計學差異（aP＜0.05，bP＜0.01）;Bax mRNA的表達情況如下:順鉑10g·L-1聯(lián)合艾迪25ml·L-1、50ml·L-1、100ml·L-1組與僅用順鉑10g·L-

12、1組灰度值相比后進行統(tǒng)計學分析得出t值分別為-2.457、-6.031、-9.220，具有極顯著性統(tǒng)計學差異，P=0.020、0.000、0.000（cP＜0.01）(n=3); Bcl-xlmRNA的表達情況如下:順鉑10g·L-1聯(lián)合艾迪25ml·L-1、50ml·L-1、100ml·L-1組與僅用順鉑10g·L-1組灰度值相比后進行統(tǒng)計學分析得出t值分別為2.457、7.888、9.611，具有統(tǒng)計學差異，均P=0.000(cP＜

13、0.01）。
　　2.臨床研究結(jié)果
　　2.1近期療效評定
　　觀察組和對照組的總有效率依次為22.72％、28.58％，穩(wěn)定率依次為84.09％、78.57％。兩組治療后均無完全緩解病例，觀察組的部分緩解者，穩(wěn)定者均略高于對照組，經(jīng)檢驗x2=0.448，均不具有統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，兩組患者近期療效的總有效率及穩(wěn)定率相比，經(jīng)檢驗x2=0.015，均無顯著性差異(P＞0.05)。
　　2.2臨床癥候改善情況

14、比較
　　觀察組與對照組進行比較，胸骨后疼痛及吞咽困難2個臨床癥狀顯著改善，經(jīng)檢驗x2=8.863，具有明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　2.3生存質(zhì)量評價
　　治療后將兩組患者的生活質(zhì)量評分變化進行比較，觀察組的有效率為90.91％，對照組為76.19％。經(jīng)檢驗，x2=8.165，具有明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。由此可知，觀察組在改善患者的生活質(zhì)量方面較對照組更好。
　　2.4毒性反應評價
　

15、　觀察組及對照組Ⅱ度及Ⅱ度以上白細胞減少的發(fā)生率分別為20.45％(9/44)、33.33％(14/42)，經(jīng)檢驗，x2=4.338，具有明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.05);觀察組及對照組Ⅱ度及Ⅱ度以上血小板降低的發(fā)生率分別為6.82％(3/44)、16.67％(7/42)，經(jīng)檢驗，x2=4.735，具有明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。血小板降低及胃腸道反應比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）.
　　結(jié)論:
　　1.艾迪能

16、抑制食管癌Eca-109細胞的增殖，并呈現(xiàn)出顯著濃度依賴性，但即使將艾迪的使用劑量增加至很大的劑量，對食管癌細胞的抑制率還沒有達到半數(shù)，這表明它的抗腫瘤效果并沒有想象中那么強大，與傳統(tǒng)的化療藥物的細胞毒性效果之間還存在著較大的差距。
　　2.順鉑對食管癌Eca-109細胞增殖的抑制效果也表現(xiàn)出與艾迪類似的劑量依賴性。而當10g·L-1順鉑與不同濃度的艾迪共同作用時，增加艾迪注射液的使用劑量，會顯著增強順鉑對食管癌Eca-109細胞

17、增殖的殺傷
　　作用（P＜0.01）。
　　3.當10g·L1順鉑與不同劑量的艾迪共同作用時，增加艾迪注射液的使用劑量，也表現(xiàn)出協(xié)同順鉑誘導食管癌Eca-109細胞發(fā)生調(diào)亡，不論是從細胞組織形態(tài)學改變還是凋亡細胞百分比的變化來看，均具有較明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.01）。
　　4.當10g·L-1順鉑與不同劑量的艾迪聯(lián)合使用時，比僅用10 g·L-1順鉑更能顯著性上調(diào)促凋亡基因的表達、下調(diào)抗凋亡基因的表達，且均有極顯著