骨髓干細(xì)胞外基質(zhì)對脂肪干細(xì)胞影響實驗研究.pdf

1、背景：
　　如何修復(fù)大面積骨缺損是整形外科工作的重點和難點之一。骨再生醫(yī)學(xué)的興起為骨缺損修復(fù)手術(shù)中的骨來源提供了一種有效解決方法。骨髓干細(xì)胞由于其良好成骨能力而成為傳統(tǒng)的骨再生醫(yī)學(xué)種子細(xì)胞。但取材難產(chǎn)量少等限制了其廣泛應(yīng)用。脂肪干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)為骨再生醫(yī)學(xué)提供了另外一種良好的種子細(xì)胞。
　　骨再生醫(yī)學(xué)中傳統(tǒng)的種子細(xì)胞擴(kuò)增方法在增加細(xì)胞數(shù)量的同時也會導(dǎo)致細(xì)胞分化能力的逐步喪失。由此，尋找一種新的，能夠用來擴(kuò)增細(xì)胞，又能維持其分化能

2、力的培養(yǎng)材料是相關(guān)研究人員的研究方向之一。
　　文獻(xiàn)證實細(xì)胞外基質(zhì)有可能是一種理想的種子細(xì)胞擴(kuò)增材料。
　　由此我們設(shè)計并進(jìn)行了如下實驗驗證人骨髓干細(xì)胞來源細(xì)胞外基質(zhì)對脂肪干細(xì)胞擴(kuò)增能力及對其成骨分化能力的影響。
　　目的：
　　本實驗應(yīng)用人骨髓細(xì)胞來源細(xì)胞外基質(zhì)做為脂肪干細(xì)胞的擴(kuò)增培養(yǎng)材料，以常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)皿（傳統(tǒng)細(xì)胞擴(kuò)增方法）作為對照，對擴(kuò)增過程中脂肪干細(xì)胞的增殖及擴(kuò)增后細(xì)胞的增殖分化能力（特別是成骨方面的分化

3、）進(jìn)行相關(guān)研究，從而對人細(xì)胞外基質(zhì)對脂肪干細(xì)胞的影響做出一些初步探索。
　　方法：
　　本實驗通過對比兩種不同細(xì)胞培養(yǎng)材料（常規(guī)培養(yǎng)皿和細(xì)胞外基質(zhì)）中的擴(kuò)增的脂肪干細(xì)胞在細(xì)胞增殖和成脂成骨分化方面的變化來探討細(xì)胞外基質(zhì)對脂肪干細(xì)胞的影響。
　　原代脂肪干細(xì)胞分別以相同濃度接種于常規(guī)培養(yǎng)皿和細(xì)胞外基質(zhì)上，連續(xù)培養(yǎng)擴(kuò)增2代，其間記錄每代細(xì)胞增殖數(shù)量。擴(kuò)增后的細(xì)胞分別使用MTT法測定細(xì)胞的增殖速度，單細(xì)胞克隆實驗測定細(xì)胞的自

4、我復(fù)制能力，單細(xì)胞克隆成脂或成骨誘導(dǎo)實驗測定細(xì)胞的體外分化能力，實時定量PCR測定細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)情況，動物體內(nèi)實驗檢測細(xì)胞在體內(nèi)的擴(kuò)增成骨情況。
　　結(jié)果：
　　原代脂肪干細(xì)胞經(jīng)人骨髓來源的細(xì)胞外基質(zhì)連續(xù)兩代擴(kuò)增后，其數(shù)量為常規(guī)培養(yǎng)皿所得細(xì)胞數(shù)量的3.27倍。當(dāng)細(xì)胞脫離細(xì)胞外基質(zhì)環(huán)境后重新進(jìn)行增殖能力和自我復(fù)制能力測定，結(jié)果顯示與對照組相比無明顯區(qū)別。
　　在人骨髓干細(xì)胞來源細(xì)胞外基質(zhì)上連續(xù)兩代的擴(kuò)增后的脂肪干細(xì)胞

5、具備成脂能力的克隆數(shù)量減少，而成骨克隆數(shù)量增加；Real time PCR顯示經(jīng)細(xì)胞外基質(zhì)擴(kuò)增后的脂肪干細(xì)胞成骨相關(guān)基因表達(dá)增高；體內(nèi)成骨實驗結(jié)果顯示經(jīng)細(xì)胞外基質(zhì)擴(kuò)增后的脂肪干細(xì)胞，形成的骨質(zhì)膠原的量明顯多于常規(guī)擴(kuò)增細(xì)胞所形成的膠原量。
　　結(jié)論：
　　與傳統(tǒng)的細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增方法相比，人骨髓來源細(xì)胞外基質(zhì)能夠迅速擴(kuò)增脂肪組織干細(xì)胞并且在擴(kuò)增過程中對脂肪干細(xì)胞分化產(chǎn)生影響：抑制成脂促進(jìn)成骨。
　　人骨髓干細(xì)胞來源的細(xì)胞外基