Annexin7和UCH-L3在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道轉(zhuǎn)移株中的表達(dá).pdf

1、目的：轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致大多數(shù)腫瘤患者死亡的主要原因，腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制及防治已成為當(dāng)今重要的研究課題。目前認(rèn)為，腫瘤的轉(zhuǎn)移與其發(fā)生一樣，也涉及腫瘤細(xì)胞多個(gè)基因的改變。其中抑癌基因的丟失和失活，可引起腫瘤細(xì)胞發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移的表型出現(xiàn)。候選抑癌基因Annexin7(ANX7)位于人類染色體10q21.1-21.2，屬于鈣依賴的磷脂膜結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白家族成員，在亞細(xì)胞水平定位于細(xì)胞核和胞液中，參與細(xì)胞外分泌、嗜鉻顆粒的聚集及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，并與腫瘤進(jìn)展

2、和預(yù)后密切相關(guān)。LCH-L3屬泛素C-末端水解酶家族，泛素系統(tǒng)作用于細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)錄活性、增殖及凋亡等生理病理過(guò)程。LICH-L3與腫瘤的關(guān)系研究甚少，目前尚未見(jiàn)有其與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)聯(lián)的報(bào)告。本研究觀察ANX7、UCH-L3基因編碼蛋白在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道轉(zhuǎn)移株(Hca-F、Hca-P)中的表達(dá)水平，分析它們?cè)谶@兩個(gè)細(xì)胞株中表達(dá)的關(guān)系及意義，以進(jìn)一步探討ANX7、LICH-L3基因在腫瘤轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用及相關(guān)的分子病理學(xué)機(jī)制。

3、 方法：以小鼠腹水型肝癌淋巴道高轉(zhuǎn)移株(Hca-F)和低轉(zhuǎn)移株(Hca-P)為研究對(duì)象，采用’Westem Blot、免疫細(xì)胞化學(xué)和流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)ANX7蛋白、UCH-L3蛋白在Hca-F和Hca-P兩細(xì)胞株的表達(dá)。 結(jié)果： 1.蛋白質(zhì)濃度測(cè)定：運(yùn)用超聲破碎法處理細(xì)胞，測(cè)得Hca-F總蛋白濃度為6.06μg/μl，Hca-P為2.48μg/μl。 2.Westem Blot結(jié)果：ANX7蛋白在Hca-F細(xì)

4、胞中表達(dá)的表達(dá)相對(duì)值為0.0895，顯著低于Hca-P中的0.226(P<0.01)；UCH-L3蛋白在Hca-F中的表達(dá)相對(duì)值是0.158，顯著低于Hca-P中的0.292(P<0.01)。 3.免疫細(xì)胞化學(xué)顯示，Hca-F細(xì)胞中ANX7蛋白可定位于胞核和胞漿，但主要位于胞核，在Hca-P細(xì)胞中主要定位于胞漿。ANX7蛋白在兩細(xì)胞株(Hca-F、Hea-P)的IOD均值分別為10862.62和1633.68；UCH-L3蛋白

5、在Hca-F、Hca-P細(xì)胞中均主要定位于胞漿，UCH-L3在兩細(xì)胞株(Hca-F、Hca-P)的IOD均值分別為21652.17和49693.65。ANX7蛋白在Hca-F細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于Hca-P(P<0.001)；UCH-L3蛋白Hca-F中的表達(dá)明顯低于Hca-P(P<0.001)。 4.流式細(xì)胞儀結(jié)果：ANX7蛋白在Hca-F和Hca-P中的RFI均值分別為57.705和17.605；UCH-L3蛋白在Hca-F、Hca-

6、P中的RFI均值分別為2173.606和3868.10。Hca-F細(xì)胞中ANX7蛋白的表達(dá)高于Hca-P(P<0.01)；UCH-L3蛋白在Hca-F中的表達(dá)顯著低于Hca-P(P<0.001)。 結(jié)論：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，ANX7蛋白在Hca-F細(xì)胞中的表達(dá)顯著高于其在Hca-P中的表達(dá)，提示ANX7蛋白可能在促進(jìn)腫瘤淋巴道轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用；UCH-L3蛋白在Hca-F細(xì)胞中的表達(dá)顯著低于其在Hca-P中的表達(dá)，UCH-L3蛋白可能