小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道轉(zhuǎn)移株蛋白質(zhì)分子的差異表達(dá).pdf

1、本實驗采用載體兩性電解質(zhì)雙向凝膠電泳(2-DE)技術(shù)，通過分離小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道轉(zhuǎn)移株細(xì)胞的總蛋白，并比較兩者的蛋白質(zhì)表達(dá)譜，展示兩者差異，以發(fā)現(xiàn)與肝癌淋巴道轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白質(zhì)分子，為進(jìn)一步研究肝癌淋巴道轉(zhuǎn)移機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 研究方法：分別采用超聲破碎和化學(xué)裂解方法提取小鼠腹水型肝癌淋巴道高轉(zhuǎn)移株(Hca-F)和低轉(zhuǎn)移株(Hca-P)的總蛋白，比色法測定蛋白質(zhì)濃度，載體兩性電解質(zhì)雙向凝膠電泳分離Hca-F和Hca-P的總蛋白

2、，凝膠經(jīng)考馬斯亮藍(lán)顯色后，PDQuest8.0圖像分析軟件進(jìn)行比對分析，識別差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。 研究結(jié)果： 1.蛋白質(zhì)濃度運(yùn)用超聲破碎法處理細(xì)胞測得Hca-F總蛋白濃度為8.54μg/μl，Hca-P為8.53μg/μl。 運(yùn)用化學(xué)裂解法處理細(xì)胞測得Hca-F總蛋白濃度為5.49μg/μl，Hca-P為6.71μg/μl。 2.2-DE圖譜特征在Hca-F細(xì)胞凝膠圖譜上可識別252個蛋白點，在Hca-P細(xì)

3、胞凝膠圖譜上可識別365個蛋白點，兩者共有213個點相匹配，這些蛋白質(zhì)分布于PI4～6，分子量在12kD～29kD之間。共檢測到9個蛋白點(PI4.01，MW15.66；PI4.00，MW25.00；PI4.09，MW15.80；PI4.12，MW14.80；PI4.14，MW22.12；PI5.38，MW21.81；PI5.41，MW21.85；PI5.45，MW21.98；PI5.69，MW14.03)在Hca-P細(xì)胞中表達(dá)量很高，

4、但在Hca-F細(xì)胞中未出現(xiàn)；未檢測到在Hca-F中表達(dá)量很高但在Hca-P中未出現(xiàn)的點。Hca-P細(xì)胞蛋白表達(dá)量是Hca-F10倍以上的蛋白點有11個(P14.02,MW15.86；PI4.11，MW15.80；PI4.71，MW19.66；PI4.88，MW13.71；PI4.85，MW26.35；PI4.78，MW28.93；PI4.97，MW28.62；PI5.08，MW12.92；PI5.45，MW21.98；PI5.49，MW

5、22.04；PI5.69，MW14.86)；Hca-F細(xì)胞蛋白表達(dá)量是Hca-P10倍以上的蛋白點有2個(PI5.22,MW19.83；PI5.37,MW19.48)。Hca-P細(xì)胞蛋白表達(dá)量是Hca-F5～10倍的蛋白點有14個；Hca-F細(xì)胞蛋白表達(dá)量是Hca-P5～10倍的蛋白點有3個。Hca-P細(xì)胞蛋白表達(dá)量是Hca-F2～5倍的蛋白點有26個；Hca-F細(xì)胞蛋白表達(dá)量是Hca-P2～5倍的蛋白點有19個。 研究結(jié)論：雙