下調(diào)N-乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶-V增強(qiáng)人鼻咽癌細(xì)胞CNE-2放射敏感性.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2009級(jí)碩士學(xué)位論文下調(diào)N一乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)移酶一V增強(qiáng)人鼻咽癌細(xì)胞CNE2放射敏感性DownregulationofGnTVenhancesnasopharyngealcarcinomacellCNE一2radiosensitivity／nvitroand／nvivo課題來源：廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目專業(yè)名稱學(xué)位申請(qǐng)人指導(dǎo)教師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員腫瘤學(xué)卓恩清張健教授陳尊器教授張為民教授夏建川教授黃宗海教授郭琳瑯教授論文

2、評(píng)閱人葛曰萍教授曹漫明教授2012年5月25日廣州中文摘要得到了低表達(dá)GnTV的細(xì)胞株CNE2GnTV／2224。分別在體外和體內(nèi)水平，通過對(duì)鼻咽癌細(xì)胞CNE2和低表達(dá)G1lTV的鼻咽癌細(xì)胞CNE2的放射敏感性比較，從而探索GnTV和鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性的關(guān)系，同時(shí)還進(jìn)一步探討其潛在的機(jī)制。二、研究目的利用RNA干擾技術(shù)，下調(diào)鼻咽癌細(xì)胞CNE2中GnTV的表達(dá)量，在體外及體內(nèi)水平觀察GnTV對(duì)鼻咽癌細(xì)胞放射敏感性的影響及其潛在的機(jī)制，為

3、鼻咽癌放射治療聯(lián)合分子靶向治療研究中新靶標(biāo)的確定提供理論依據(jù)。三、實(shí)驗(yàn)方法1、pGPU6／GFP／NeoCmTVshRNA質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定已由本課題組成員完成。pGPU6／GFP／NeoGnTV／l564和pGPU6／GFP／NeoGnTV／2224為靶向抑制GnTV表達(dá)的質(zhì)粒；pGPU6／GFP／NeoCmTV／NC為對(duì)照質(zhì)粒。2、細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染人低分化鼻咽癌細(xì)胞株CNE2培養(yǎng)于37℃5％C02條件下，含10％新生牛血清的RPMI16

4、40中，每周傳代2“3次。細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，用脂質(zhì)體Lipofectamine2000TM將質(zhì)粒導(dǎo)入CNE2細(xì)胞。利用G418篩選轉(zhuǎn)染成功的細(xì)胞。轉(zhuǎn)染成功的人鼻咽癌細(xì)胞株培養(yǎng)于含10％新生牛血清及2000ug／rniG418的RPMI一1640中。3、pGPU6／GFP／NeoGnTVshRNA干擾效果檢測(cè)aqRTPCR測(cè)定GnTVmRNA用Trizol提取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的單層培養(yǎng)細(xì)胞總RNA，采用AMV逆轉(zhuǎn)錄合成cDNAGnTV上游引