MD-2在結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌的發(fā)生中作用的研究.pdf

1、目錄摘要．?．．．．．．．．．?．．?．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．?．．．1A b s t r a c t ．．．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．3第一部分髓樣分化蛋6 - 2 ( M D - 2 ) 在人大腸癌中的表達(dá)??．6前言．．．．．．．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．6實(shí)驗(yàn)材料與方法．．．．．．．．．．

2、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．71 ．1 J 臨床資料及標(biāo)本????????????．71 ．2 實(shí)驗(yàn)所用主要設(shè)備及器材．．．?．．．．．．．．．．．．．?．．．．72 ．1 結(jié)腸癌患者組織R t - P C R 實(shí)驗(yàn)方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．82 ．2 免疫組化方法實(shí)驗(yàn)步驟????????．．92 ．3 免疫共沉淀及W e s t e r nB I o t 實(shí)驗(yàn)步驟．．．．．．?．．．1 0

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1 13 ．1 實(shí)時(shí)熒光定量P C R 結(jié)果????????．．1 13 ．2 結(jié)腸癌病人M D - 2 免疫組化染色結(jié)果．．．．．．．．．．．．．．．1 23 ．3 免疫共沉淀、W e s t e r n b I o t 結(jié)果．．．．．．．．．．．．．．．．．．14分析與討論??。。???。??????．．?．．1 4小結(jié)．．．．．．．．

4、．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．16第二部分M D 一2 抑制劑L 6 H 2 1 在小鼠慢性結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌中的作用前言．．．．．．．．．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．17實(shí)驗(yàn)材料與方法．．．．．．．．?．．．．．．．．．．．．．．．?．．．．?．．．181 。主要實(shí)驗(yàn)材料??????。??．???．1 8摘要溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文M D

5、 ．2 在結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌的發(fā)生中作用的研究目的：1 ．用生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法檢測結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌( c o l i t i s ．a(chǎn) s s o c i a t e dc o l o r e c t a lc a n c e r , C A C ) 病人的組織中髓樣分化蛋白- 2 ( m y e l o i di f f e r e n t i a t i o n ．2 ，M D ．2 ) 的表達(dá)量。證明在結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌病人的癌組織中M

6、D ．2 高表達(dá)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。明確M D ．2 在病人癌組織及正常組織中表達(dá)的差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，從而證明M D ．2 與結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌的發(fā)生相關(guān)。2 ．通過動物實(shí)驗(yàn)證明M D ．2 與結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌的發(fā)生相關(guān)，探討M D ．2 在結(jié)腸炎導(dǎo)致的癌變過程中的作用。聯(lián)合使用氧化偶氮甲烷( A z o x y m e t h a n e ，A O M ) 和葡聚糖硫酸鈉( D e x t r a ns u l f a t es o d

7、 i u m s a l t ，D S S ) 建立結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌小鼠模型。一組模型小鼠用M D ．2 抑制劑L 6 H 2 1 進(jìn)行治療，使其與單純模型組小鼠相比，有較好的狀態(tài)，便血、腹瀉較輕，體重增長較快，而且成瘤率低于單純造模組。以證明M D ．2 抑制劑有抗結(jié)腸炎、抗結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌發(fā)生的作用。通過以上兩點(diǎn)闡明：1 、M D ．2 在結(jié)腸炎相關(guān)大腸癌發(fā)生中起一定作用；2 、抑制M D ．2 對結(jié)腸炎及結(jié)腸癌有治療效果。方法：臨

8、床標(biāo)本檢測：收集溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院腫瘤外科2 0 1 0 年1 月至2 0 1 3 年1 2 月間行結(jié)腸癌根治術(shù)后，經(jīng)病理證實(shí)為結(jié)腸癌的腫瘤標(biāo)本5 1 例，及相應(yīng)病人的正常大腸組織。其中男性3 5 例，女性1 6 例；T N M 分期I 期3 例，I I期1 6 例，I I I 期2 9 例，I V 期3 例；高分化7 例，中分化3 2 例，低分化9 例，其它類型3 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移2 6 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移2 5 例( 其中有3

9、例發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移) 。準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn)：1 、經(jīng)病理證實(shí)為結(jié)腸癌；2 、有結(jié)腸炎病史；3 、術(shù)前均未接受放、化療及其他抗腫瘤治療，并無長期服用非甾體抗炎藥史：4 、有完整病歷，包括病程記錄、病理資料、檢查報(bào)告以及隨訪信息。采用實(shí)時(shí)熒光．P C R ( Q R T - P C R ) 、免疫組化、免疫共沉淀、蛋白質(zhì)印跡技術(shù)( W e s t e r nb l o t ，W B ) 等生物學(xué)方法分別檢測M D ．2 在癌組織和臨近正常組織的表達(dá)量，進(jìn)

10、行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。再把病人按上述不同條件分組進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，研究M D ．2 的表達(dá)量是否與以上各因素相關(guān)。動物實(shí)驗(yàn)：選取種屬為C 5 7 B L ／6 的雌性小鼠3 6 只。隨機(jī)分為正常對照組：A 組( 6 只) 、模型組：B 組( 1 5 ) 和L 6 H 2 1 ( 1 0 m g ／k g ) 治療組：C 組( 1 5 只) ；采采用一次性腹腔注射氧化偶氮甲烷( A O M ) 及飲用葡聚糖硫酸鈉( D S S ) 溶液三個(gè)循環(huán)的方