ALK基因在肺腺癌患者支氣管鏡標本中的檢測.pdf

1、目的：
　　 EML4/ALK(echinoderm microtubule-associated protein like4/anaplastic lymphoma kinase，棘皮動物微管相關(guān)類蛋白4/間變淋巴瘤激酶)融合基因在亞洲NSCLC患者中表達率在10％左右，我們對中國肺腺癌患者進行ALK基因的檢測，并分析臨床病理表現(xiàn)與支氣管鏡標本檢出率的關(guān)系，以明確支氣管鏡小標本用于ALK基因檢測時的檢出率和陽性率，及與提高檢出

2、率相關(guān)的因素。
　　 方法：
　　 收集100例肺腺癌患者臨床資料和支氣管鏡組織標本，采用原位免疫熒光雜交和免疫組織化學(xué)兩種方法進行ALK基因檢測，并分析臨床病理因素包括：支氣管鏡下表現(xiàn)、活檢部位和數(shù)量、免疫組織化學(xué)切片數(shù)量、病理特征及腫瘤細胞數(shù)目和比例與小標本檢出率間的關(guān)系，同時比較ALK基因陽性和陰性患者的臨床特征和預(yù)后情況。
　　 結(jié)果：
　　 共收集到108例患者的臨床資料和92例患者的支氣管鏡組

3、織標本。中國肺腺癌患者ALK基因表達率為7.8%(6/77)，原位免疫熒光雜交法對支氣管鏡標本的檢出率為71.3%(77/108)。左肺下葉和左主支氣管活檢部位的FISH檢出率高于其他部位（P=0.004）。腫瘤細胞數(shù)目大于100個者檢出率更高(P=0.00)。沒有發(fā)現(xiàn)年齡、性別、臨床分期、支氣管鏡下肉眼表現(xiàn)、活檢數(shù)量、病理診斷明確度、分化程度及免疫組織化學(xué)所用切片數(shù)與原位免疫熒光雜交法檢出率之間的關(guān)系檢出。ALK基因在小于50歲者中陽

4、性率更高（P=0.01）。6例ALK基因陽性者全部不吸煙,5例有資料者均為低分化癌，但P＞0.1。沒有發(fā)現(xiàn)ALK基因表達與性別、臨床分期及支氣管鏡下表現(xiàn)等因素的相關(guān)性。2例ALK陽性者生存時間分別只有4個月和9個月。采用D5F3單抗的免疫組織化學(xué)法敏感性50%，特異性100%。
　　 結(jié)論：
　　 FISH法對支氣管鏡小標本ALK基因的檢出率為71.3%，在中國肺腺癌患者中的陽性率為7.8%。左肺下葉和左主支氣管部位的檢

5、出率高于其他部位。腫瘤細胞數(shù)目大于100個者檢出率高。ALK基因陽性者年齡更小。D5F3單抗用于免疫組織化學(xué)法的敏感性不高，特異性好。
　　 EML4/ALK融合基因在非小細胞肺癌患者中的檢測。棘皮動物微管相關(guān)類蛋白4/間變性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated proteinlike4/Anaplastic lymphoma kinase,EML4/ALK)為發(fā)生在2號染色體短臂上的融

6、合基因，特異性表達于非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)患者的腫瘤組織中。其表達陽性者具有為肺腺癌、不吸煙及與表皮因子生長受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)、K-ras基因表達互斥等特征。EML4/ALK表達陽性者對ALK激酶抑制劑的治療有效，因此篩選出EML4/ALK陽性者有重要的臨床意義。目前最常用的為原位免疫熒光雜交法(fluorescei

7、nce in situ hybridization，F(xiàn)ISH)，敏感性和特異性高，技術(shù)成熟，有標準試劑盒，但成本較高，標本不易保存。聚合酶鏈式反應(yīng)法(polymerase chain reaction，PCR)最早用于發(fā)現(xiàn)EML4/ALK基因，但對標本要求高，易出現(xiàn)假陽性，較少用于臨床檢測。免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry,IHC)的標本可以長期保存，成本較低，但EML4/ALK蛋白在NSCLC中表達不高，如若可