2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、本文從以下幾部分進行論述:
  第一部分 SOX8在非小細胞肺癌組織中的表達及臨床病理學研究
  目的:
  運用免疫組織化學和實時熒光定量多聚酶鏈反應實驗方法對SOX8基因在80例NSCLC病理樣本中蛋白質(zhì)和mRNA水平上的表達進行研究,并對SOX8蛋白質(zhì)表達與相關(guān)臨床指標之間的關(guān)系進行研究。同時,為明確SOX8對于NSCLC患者預后的指導意義,我們對其中的77例患者進行了隨訪。
  方法:
  1.應用

2、免疫組織化學檢測NSCLC組織80例及正常支氣管肺組織7例(距原發(fā)肺癌組織邊緣>5cm)中SOX8在翻譯水平上蛋白質(zhì)的表達。同時對SOX8蛋白質(zhì)與NSCLC包括患者年齡、性別、NSCLC細胞分化狀況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分級等臨床病理指標進行相關(guān)性分析。
  2.運用實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)對NSCLC組織和正常支氣管肺組織中SOX8在轉(zhuǎn)錄水平上mRNA的表達。
  3.對隨訪資料齊全的77名NSCLC患者進行

3、隨訪,并根據(jù)免疫組織化學結(jié)果將患者分為SOX8過度表達組和SOX8低表達組,并對SOX8表達對患者生存時間的影響進行單因素生存分析(Log-rank分析)。
  結(jié)果:
  1.SOX8蛋白質(zhì)在非小細胞肺癌和正常肺組織中的表達
  在翻譯水平上通過免疫組織化學檢測顯示,正常肺組織中沒有發(fā)現(xiàn)SOX8蛋白質(zhì)的表達,而在NSCLC中有過度表達(P<0.01)。SOX8以細胞核著色為主,僅有散在的細胞質(zhì)著色。其中,NSCLC中

4、SOX8總陽性(率)為86.25%(69/80),而強表達數(shù)占62.5%(50/80)。
  2.SOX8表達與NSCLC與臨床病理因子之間的關(guān)系
  為進一步探討SOX8表達在NSCLC上的意義,我們分析了SOX8與患者臨床參數(shù)之間的相關(guān)關(guān)系(表1-1)。結(jié)果顯示,SOX8的表達程度與腫瘤體積(P<0.001)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)、不同分化程度(P=0.015)和臨床分級(P=0.013)相關(guān)。與之相反,SOX8

5、基因與組織分型、性別和飲酒/吸煙史無關(guān)。同時,年齡對SOX8基因的表達也無影響。
  3.SOX8在非小細胞肺癌和正常肺組織中的mRNA表達
  為研究SOX8在NSCLC組織和正常肺組織中轉(zhuǎn)錄水平上的表達情況,我們采取qRT-PCR方法進行。結(jié)果顯示,在轉(zhuǎn)錄水平上通過qRT-PCR檢測,單因素方差分析結(jié)合Tukey's post hoc檢驗顯示,中低分化NSCLC(11.71倍, P<0.001)和高分化NSCLC(6.5

6、2倍, P=0.047)中SOX8基因的表達顯著高于正常支氣管肺組織。同時中低分化NSCLC中SOX8基因的表達顯著高于高分化NSCLC(1.80倍,P<0.001)。
  4.SOX8蛋白質(zhì)表達與NSCLC患者預后的關(guān)系
  Log-Rank單因素生存分析顯示,SOX8蛋白高表達組患者(36.5個月,n=28)術(shù)后生存時間顯示短于低表達組患者(48.7個月,n=49, P=0.006)。
  結(jié)論:
  1.S

7、OX8在正常支氣管肺組織中未觀察到明顯表達。
  2.SOX8在NSCLC中高度表達,同時與腫瘤體積、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分級存在顯著的相關(guān)關(guān)系。SOX8可能與NSCLC細胞的增殖性和侵襲性存在某種相關(guān)關(guān)系。
  3.在NSCLC患者中,SOX8高表達組的預后顯著差于低表達組,提示SOX8表達程度可以作為臨床判斷NSCLC的有效指標。
  第二部分 miRNA-124治療非小細胞型肺癌的體外研究
  目的:

8、
  在本部分將通過TargetScan等軟件預測可能的miRNA,并驗證該miRNA即miRNA-124與SOX8基因間的相互作用關(guān)系以及miRNA-124過表達及抑制劑對NSCLC細胞系增殖和遷移的影響。
  方法:
  1.利用公眾專業(yè)檢索軟件對SOX8基因的調(diào)節(jié)性miRNA進行預測
  利用TargetScan,MicroCosm Targets version5和microRNA.org數(shù)據(jù)庫對SOX8

9、可能的上游效應miRNA進行了預測及SOX83'UTR可能與miRNA的結(jié)合位點
  2.檢測NSCLC組織和正常肺組織中miRNA-124的表達情況
  利用qRT-PCR檢測miRNA-124在NSCLC組織中miRNA-124的表達情況并進行比較。
  3.對miRNA-124與SOX8相互作用進行驗證
  驗證方法為擴增包含SOX83'UTR結(jié)合位點的片段,并利用試劑盒制作結(jié)合位點的突變型片段。然后利用熒

10、光素酶基因報告手段進行驗證。
  4.利用miRNA-124 mimic和miRNA-124 inhibitor驗證miRNA-124對NSCLC增殖能力和遷移能力的影響
  首先利用lipofectin試劑盒將miRNA-124 mimic和miRNA-124 inhibitor轉(zhuǎn)染人NSCLC細胞系A549和H1299,然后CCK-8檢測兩種試劑對兩個細胞系腫瘤細胞增殖能力的影響,并利用Transwell檢測方法檢測2種

11、細胞系接受處理后遷移能力的變化。
  結(jié)果:
  1.NSCLC患者腫瘤組織中miRNA-124表達量降低
  在本部分的研究中,我們發(fā)現(xiàn)在9個配對的NSCLC樣本中,有8組腫瘤組織的miRNA-124的表達量顯著低于臨近的正常肺支氣管組織(8/9,88.9%)
  2.SOX8是miRNA-124的靶點基因
  在熒光素酶基因報告檢測中,我們發(fā)現(xiàn)與突變型SOX83'UTR片段相比較,miRNA-124使野

12、生型SOX83'UTR片段的相對熒光活性降低(P=0.002)。在NSCLC細胞系H1299中,通過Western blot檢測,我們發(fā)現(xiàn)miRNA-124 mimics降低了SOX8蛋白質(zhì)的表達,而miRNA-124抑制物則使SOX8蛋白的表達升高,這一結(jié)果進一步證實了miRNA-124對SOX8基因的調(diào)控作用。
  3.miRNA-124高表達抑制NSCLC細胞系的細胞增殖能力
  在本部分試驗中我們分別用miRNA-1

13、24 mimic(模擬miRNA124高表達)和miRNA-124 inhibitor分別轉(zhuǎn)染人NSCLC細胞系A549和H1299,細胞增殖實驗顯示,miRNA-124 mimic降低了兩種細胞系的增殖能力,而miRNA-124 inhibitor則起到了相反的作用,增強了兩種細胞系的增殖能力(P<0.05)。
  4.miRNA-124高表達抑制NSCLC細胞系的細胞遷移能力
  在上一步部分試驗中我們發(fā)現(xiàn)SOX8的過度

14、表達與NSCLC患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間存在相關(guān)關(guān)系,因此在本部分試驗中我們分別用miRNA-124 mimic(模擬miRNA-124高表達)和miRNA-124 inhibitor分別轉(zhuǎn)染人NSCLC細胞系A549和H1299,并利用Transwell實驗研究了miRNA-124對細胞系遷移能力影響。結(jié)果顯示,miRNA-124 mimic顯著抑制了A549細胞和H1299細胞的遷移能力(P<0.05),而miRNA-124 inhibi

15、tor則增強了兩種NSCLC細胞系的遷移能力,結(jié)果顯示miRNA-124的高表達可以有效降低NSCLC細胞系的遷移能力。
  結(jié)論:
  1.miRNA-124在NSCLC中的表達低于正常肺組織
  2.miRNA-124是SOX8基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子,miRNA-124的過表達可以在轉(zhuǎn)錄后和翻譯水平上降低SOX8基因的表達。
  3.miRNA-124過表達可以有效降低人NSCLC細胞系A549和H1299的增殖

16、能力和遷移能力。
  第三部分 miRNA agomir-124治療非小細胞型肺癌裸小鼠皮下種植瘤模型的研究
  目的:
  在本部分中決定對裸鼠NSCLC細胞系A549皮下種植瘤模型利用miRNA agomir124進行體內(nèi)實驗研究。
  方法:
  利用人NSCLC細胞系A549建立裸小鼠皮下種植瘤,在建模8天后進行miRNAagomir-124進行處理(1 nmol/50μ L,每隔4天1次)。每隔4

17、天測量腫瘤體積變化,并在建模后第36天處死小鼠,取瘤并稱重。
  結(jié)果:
  1.miRNA agomir-124對人NSCLC細胞系A549皮下種植瘤生長的影響
  與對照組(空白對照組)相比,實驗組(miRNA agomir-124治療組)自腫瘤后16天起的皮下種植瘤體積增加速度減慢(P<0.01),同時實驗終止時所取瘤體治療顯著減小(411.8 mg vs.227.1 mg, P<0.01),抑瘤率為38.5%。

18、
  結(jié)論:
  1.人NSCLC細胞系A549裸小鼠皮下種植瘤建模成功。
  2.miRNA agomir-124可以作為動物實驗中研究miRNA-124功能的理想工具。
  3.模擬miRNA-124高表達的miRNA agomir-124可以有效抑制NSCLC皮下種植瘤的生長,與細胞水平研究結(jié)果一致,證實miRNA-124是抑制NSCLC腫瘤生長的抑癌因子。利用miRNA-124治療NSCLC腫瘤是一種可能

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