KDM1A對胃癌侵襲轉移能力的影響及調節(jié)機制的研究.pdf

1、背景：
　　根據WHO統(tǒng)計數據，全世界范圍內，在腫瘤疾病中，胃癌的發(fā)病率位居第四，死亡率則是第二位。其發(fā)病率有地域及性別差異，我國屬胃癌高發(fā)區(qū)域，胃癌的流行病學形勢更加嚴峻。因胃癌的早期臨床表現缺乏特征性，不易引起患者重視，且我國胃癌普查制度尚未完善，診斷時許多患者已至進展期，雖然大多數患者會接受手術治療，但術后轉移和復發(fā)嚴重影響胃癌患者預后。
　　賴氨酸特異性組蛋白去甲基化酶1(KDM1A)位于人類1號染色體短臂3區(qū)6帶1

2、2亞帶。KDM1A是第一個被定義的組蛋白特異性去甲基化酶，能夠特異性的去除組蛋白H3第4位及第9位賴氨酸的一甲基及二甲基化，KDM1A在多種腫瘤組織及細胞中表達升高，如前列腺癌、乳腺癌、膀胱癌、結直腸癌、肺癌及中樞神經系統(tǒng)腫瘤。KDM1A可能參與多條信號通路，而影響腫瘤發(fā)生、生長、增殖、侵襲轉移、耐藥等多個環(huán)節(jié)。
　　miR-137位于人類1號染色體短臂2區(qū)2帶(1 p22)，有實驗證實其可作為一個腫瘤抑制基因在一些腫瘤中發(fā)揮作用

3、。此外miR-137也參與了干細胞的分化與發(fā)育，神經退行性疾病，精神分裂癥、缺血缺氧疾病的病理生理學改變。miR-137與miR-234同屬于miR-137家族。
　　目的：
　　在組織和細胞水平探索KDM1A、miR-137的表達與胃癌侵襲轉移的相關性;通過RNA干擾技術抑制KDM1A的表達，檢測其對胃癌增殖、侵襲、凋亡的影響;并通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測miR-137與KDM1A之間的靶向調節(jié)關系。
　　方法：

4、r>　　1、通過western blot技術檢測24對胃癌及癌旁組織中KDM1A蛋白的表達，通過實時熒光定量逆轉錄PCR檢測24對胃癌組織及癌旁組織中KDM1A mRNA及miR-137的表達，并分析其與胃癌臨床病理特征之間的關系。
　　2、通過Transwell侵襲實驗檢測胃癌細胞株AGS、SGC7901、BGC823及人胚胃上皮細胞株GES1的侵襲性，同時利用western blot和實時熒光定量逆轉錄PCR技術檢測KDM1A

5、蛋白、KDM1A mRNA、miR-137在各個細胞株中的表達，并分析其與胃癌細胞株侵襲性的相關關系。
　　3、利用RNA干擾技術抑制胃癌細胞株BGC823中KDM1A的表達，同時利用MTT細胞增殖實驗、Transwell細胞侵襲實驗、FCM細胞凋亡實驗檢測KDM1A的表達對胃癌細胞BGC823增殖、侵襲、凋亡的影響。
　　4、通過雙熒光素酶報告系統(tǒng)檢測miR-137是否能夠靶向作用于KDM1A mRNA的3'-UTR。

6、r>　　結果：
　　1、以KDM1A蛋白質表達量、KDM1A mRNA表達量、miR-137表達量為因變量，以分類變量T分期、N分期、M分期、G分期、性別、年齡（以50歲為臨界點分為兩組）、HER2免疫組織化學染色診斷結果、手術切除淋巴結陽性率、組織來源（胃癌組織或癌旁組織）為自變量進行線性回歸分析及單因素分析。分析發(fā)現來自T分期晚的胃癌組織中KDM1A蛋白質表達量高;來自T分期晚的胃癌組織中miR-137含量低。N分期、M分期、

7、G分期、HER2免疫組織化學染色診斷結果等與組織中KDM1A蛋白質含量、KDM1A mRNA含量、miR-137含量之間的線性關系并不具有統(tǒng)計學意義。
　　2、在三株胃癌細胞(AGS，SGC7901，BGC823)及一株人胚胃上皮細胞株(GES1)中細胞穿膜細胞數、KDM1A蛋白表達量、KDM1AmRNA表達量、miR-137表達量之間均存在相關關系。穿膜細胞數與KDM1A蛋白及mRNA表達量之間呈正相關;穿膜細胞數與miR-13

8、7表達量之間呈負相關;KDM1A蛋白及mRNA表達量與miR-137表達量之間呈負相關。
　　3、合成三段siRNA序列，經檢測siRNA-705沉默效率最高。其在體外干擾胃癌細胞的增殖、侵襲轉移能力，并可誘導細胞凋亡。
　　4、miR-137能夠特異性結合于KDM1A mRNA的3'-UTR區(qū)，表觀改變miR-137的表達量后， KDM1A的表達隨之改變。miR-137模擬物可降低KDM1A蛋白及mRNA的表達，miR-1

9、37抑制物可升高KDM1A蛋白及mRNA的表達。
　　結論：
　　1、KDM1A在T分期較晚的胃癌組織中表達增高，而miR-137表達降低。KDM1A可能與胃癌的侵襲能力有關，且miR-137可能通過與KDM1A mRNA特異結合，從而抑制其轉錄后基因表達。
　　2、在體外實驗中，KDM1A的表達水平與胃癌細胞的侵襲能力呈正相關，而miR-137的表達水平與胃癌細胞的侵襲能力呈負相關。
　　3、在體外實驗中，si