黃連素調(diào)整腸道菌群對非酒精性脂肪性肝炎的改善作用.pdf

1、背景與目的：非酒精性脂肪性肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）是目前嚴(yán)重威脅人類健康的第一大慢性肝病，疾病譜包括單純性脂肪肝（simple fatty liver，SFL）、非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis，NASH）及其相關(guān)肝硬化,而炎癥反應(yīng)是SFL發(fā)展為NASH關(guān)鍵限速步驟[73]。肥胖是NASH發(fā)生發(fā)展的最常見危險因素，胰島素抵抗(ins

2、ulin resistance，IR)是NASH發(fā)病的主要影響因素之一[73]。近來研究報道認(rèn)為腸道菌群與肥胖和胰島素敏感性相關(guān)聯(lián)，考慮到NASH與IR和肥胖等之間的聯(lián)系，且腸源性內(nèi)毒素血癥（Intestinal endotoxemia，IETM）可導(dǎo)致肝臟中多種炎性反應(yīng)相關(guān)因子表達(dá)量增加，故推測調(diào)節(jié)腸道菌群可能對NASH的發(fā)生發(fā)展存在一定的影響[73]。黃連素通過腸道吸收有限，主要通過調(diào)整腸道菌群發(fā)揮作用，故選用這一在臨床中常用治療腹

3、瀉的中成藥來調(diào)節(jié)腸道菌群，以此發(fā)現(xiàn)探討腸道菌群改變對NASH發(fā)生發(fā)展的影響。
　　方法：35只雄性Babl/c小鼠經(jīng)普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)2周后，隨機(jī)分為對照組、模型組和干預(yù)組，對照組予以普通飼料、模型組與干預(yù)組持續(xù)給予高脂飼料。自高脂飲食第5周開始，干預(yù)組予以口服黃連素200mg/kg*d，對照組和模型組每日給與等量蒸餾水，持續(xù)灌胃9周。共飼養(yǎng)13周，隔夜禁食后次日經(jīng)眼眶靜脈取血，頸椎脫臼處死動物。自高脂飲食開始每周記錄小鼠體重。通

4、過HE染色觀察各組小鼠肝組織病理學(xué)變化；生化分析儀測定血漿天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、甘油三酯、膽固醇、血糖、胰島素等生化指標(biāo)；提取盲腸內(nèi)容物DNA后采用real time PCR相對定量乳桿菌、雙歧桿菌、大腸埃希菌及擬桿菌門和厚壁菌門；real time PCR相對定量各組肝組織炎癥因子如CD14、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α、白細(xì)胞介素(interleukin，IL）-1、IL-6

5、 mRNA表達(dá)量水平。為直接比較不同飲食飼養(yǎng)導(dǎo)致的循環(huán)內(nèi)毒素變化，普通飲食和高脂飲食各飼養(yǎng)8周SD大鼠，經(jīng)HE染色確定NASH模型形成后，通過鱟試劑終點比色法檢測其門靜脈血清內(nèi)毒素水平。
　　結(jié)果：在13周末，模型組小鼠體重高于對照組（p<0.05），其睪脂指數(shù)和肝指數(shù)相比對照組顯著升高（p均<0.01），肝組織病理學(xué)顯示明顯脂肪變及炎癥，NAFLD活動度積分（NAS）明顯高于對照組（p<0.01）；模型組血清生化指標(biāo)均高于對照組

6、，其中ALT、甘油三酯、膽固醇、空腹血糖均顯著高于對照組（p均<0.01），AST、胰島素亦水平升高（p均<0.05 vs.對照組）；肝臟炎癥因子mRNA水平均高于對照組，其中IL-1、IL-6、TNF-α顯著升高（p均<0.01 vs.對照組）；模型組盲腸中每克濕便細(xì)菌DNA拷貝量，如擬桿菌門、雙歧桿菌和乳桿菌均較對照組的降低（p均<0.05），兩組比較厚壁菌門和大腸桿菌沒有統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）；與模型組比，干預(yù)組小鼠體重和睪脂

7、指數(shù)減?。╬<0.05），肝指數(shù)相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05），干預(yù)組肝組織病理學(xué)小葉內(nèi)炎癥明顯減輕，NAS積分顯著低于模型組（p<0.01），生化指標(biāo)較模型組改善，其中ALT、甘油三酯、空腹血糖胰島素均低于模型組（p<0.05），肝臟炎癥性因子mRNA水平均明顯下調(diào)，CD14、IL-1、IL-6、TNF-α顯著降低（p均<0.01vs.模型組），盲腸內(nèi)容物中擬桿菌門和雙歧桿菌的數(shù)量與模型組的具有統(tǒng)計學(xué)差異，其中擬桿菌門升高（p<0

8、.05 vs.模型組），雙歧桿菌顯著高于模型組（p<0.01），、乳桿菌呈現(xiàn)升高趨勢，厚壁菌門與大腸桿菌未見統(tǒng)計學(xué)差異（p>0.05）。高脂飲食大鼠的門靜脈血清內(nèi)毒素檢測陽性率高于普通飲食組。
　　結(jié)論：小鼠高脂飲食引起的肥胖、NASH等代謝紊亂與腸道菌群密切相關(guān)；黃連素能夠改善高脂飲食相關(guān)的腸道菌群紊亂，選擇性提高雙歧桿菌、乳桿菌等優(yōu)勢菌的比例以及擬桿菌門/厚壁菌門的比值；黃連素通過恢復(fù)腸道菌群結(jié)構(gòu)，從而抑制炎癥反應(yīng)，發(fā)揮減輕N