依維莫司聯(lián)合吉非替尼抑制非小細胞肺癌細胞系的效果和作用機制.pdf

1、第一部分:虎杖苷對非酒精性脂肪肝藥效研究
　　 1.根據(jù)肝臟病理狀態(tài),可見彌漫性肝細胞大泡樣脂肪變,無明顯炎癥、壞死及纖維化,NAFLD大鼠早期單純性脂肪肝階段模型復(fù)制成功。
　　 2.與空白模型組相比,虎杖苷高劑量組體重明顯減低(P<0.01),增長速度較慢,肝臟體減小,肝濕重減輕,肝指數(shù)明顯降低(P<0.01)。肝臟病理顯示,虎杖苷高、中劑量組大鼠肝細胞脂肪沉積明顯減少(P<0.01),肝細胞形態(tài)、排列均明顯好轉(zhuǎn)。<

2、br>　　 3.與空白模型組相比,虎杖苷高、中劑量組大鼠血清ALT明顯降低(P<0.01,P<0.05),虎杖苷高劑量組明顯優(yōu)于非諾貝特組(P<0.05)；虎杖苷高、中劑量組大鼠血清TG降低(P<0.01,P<0.05); 虎杖苷高劑量組大鼠血清TC、LDL-C降低(P<0.05,P<0.01),HDL-C升高(P<0.01)?；⒄溶崭鲃┝拷M均能降低FFA(P<0.01)。
　　 第二部分:虎杖苷治療NAFLD部分機制研究

3、r>　　 1.與正常對照組比較,空白模型組大鼠總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶(GST)明顯減低(P<0.01),與空白模型組比較,虎杖苷高、中劑量組均能增高肝組織T-AOC、SOD、GST,同時降低肝組織MDA(P<0.01),其中虎杖苷高劑量組提高肝臟抗氧化能力效果均優(yōu)于非諾貝特組(P<0.01)。
　　 2.與正常對照組比較,空白模型組大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FIN)明

4、顯增高(P<0.01),IRI增高,ISI明顯降低(P<0.01,P<0.05)。與空白模型組比較,虎杖苷高、中劑量組及非諾貝特組能降低FBG、FIN(P<0.01,P<0.05),減低胰島素抵抗指數(shù)(IRI),增高胰島素敏感指數(shù)(ISI)(P<0.01,P<0.05),其中虎杖苷高劑量效果均明顯優(yōu)于優(yōu)于非諾貝特組(P<0.01,P<0.05)?；⒄溶盏蛣┝扛髦笜伺c空白模型組無差異(P>0.05)?；⒄溶崭?、中劑量組在降低IRI,增加I

5、SI效果優(yōu)于虎杖苷低劑量組(P<0.01)。
　　 3.與正常對照組比較,空白模型組大鼠血清TNF-α明顯高于(P<0.01),與空白模型組相比,虎杖苷高、中劑量組及非諾貝特組均能明顯降低血清TNF-α含量(P案。
　　 本課題通過對多種NSCLC細胞系進行藥物敏感性及信號通路相關(guān)的實驗,觀察EGFR-TKI和mTOR抑制劑聯(lián)合應(yīng)用的效果并探討其聯(lián)合作用的機制。
　　 第一章 吉非替尼和依維莫司聯(lián)合應(yīng)用對腫瘤細胞

6、增殖的抑制作用
　　 方法
　　 采用MTT增殖抑制實驗對細胞進行單藥藥敏實驗以及觀察不同方式的同時及序貫用藥的抑制效果,采用CalcuSyn分析軟件計算綜合指數(shù)(combinationindex,CI)。
　　 建立多種單藥或聯(lián)合藥物不同方案處理的細胞模型,采用western blot的方法檢測多種靶向抑制劑對不同細胞模型的信號通路相關(guān)分子的影響。
　　 結(jié)論
　　 在對吉非替尼耐藥和敏感的細胞

7、系中,吉非替尼和依維莫司兩藥聯(lián)合應(yīng)用的方案可以增強單藥的增殖抑制效果,抑制率隨著藥物劑量的增加而增大。但對于不同細胞系能達到最大抑制作用的聯(lián)合方案有所不同；對于耐藥細胞,兩藥同時的方案抑制效果更顯著；對于敏感細胞,先給予依維莫司再給予吉非替尼的序貫方法抑制增殖效果最為明顯。
　　 所有細胞系中,同時和序貫方案在小劑量水平的聯(lián)合都具有協(xié)同效應(yīng),但隨著藥物濃度增加,協(xié)同效應(yīng)減弱甚至可表現(xiàn)為拮抗。
　　 第二章 吉非替尼和依維

8、莫司聯(lián)合應(yīng)用對信號通路的影響
　　 方法
　　 建立吉非替尼耐藥細胞模型,以及用不同的小分子靶向抑制劑處理細胞的模型,采用western blot的方法觀察處理后信號通路不同分子磷酸化的改變情況。
　　 結(jié)論
　　 在對吉非替尼敏感,原發(fā)或繼發(fā)性耐藥的的細胞系中,吉非替尼和依維莫司單藥可抑制mTOR、EGFR、p70S6K等信號分子的磷酸化水平,聯(lián)合應(yīng)用的抑制效果優(yōu)于任一單藥。依維莫司對p-mTOR和p-

9、p70S6K有明顯的抑制作用,但對p-Akt或p-MAPK抑制作用不明顯甚至可引起反饋性活化,聯(lián)合吉非替尼可有效地抑制Akt和MAPK的磷酸化表達水平而且抑制p-MAPK的作用是儀作用于PI3K信號通路的小分子抑制劑所不能替代的。由此可見,吉非替尼和依維莫司兩種藥物在抑制信號通路中能夠發(fā)揮互補作用,通過同時抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K和Ras/Raf/ERK/MAPK兩條通路上的信號分子進一步影響蛋白質(zhì)合成及功能,從而增

10、強對腫瘤細胞的增殖抑制和殺傷作用。
　　 全文結(jié)論
　　 本文在多種對吉非替尼耐藥和敏感的NSCLC細胞系中進行了吉非替尼與依維莫司同時及序貫方案聯(lián)合應(yīng)用的增殖抑制實驗。在對吉非替尼耐藥和敏感的細胞系中,吉非替尼和依維莫司兩藥聯(lián)合應(yīng)用的方案可以增強單藥的增殖抑制效果,抑制率隨著藥物劑量的增加而增大。但對于不同細胞系能達到最大抑制作用的聯(lián)合方案有所不同。
　　 從協(xié)同效應(yīng)的角度而言,兩藥聯(lián)合應(yīng)用在小劑量水平可呈現(xiàn)出

11、協(xié)同效應(yīng),但協(xié)同效應(yīng)隨著劑量增加而減弱甚至可表現(xiàn)為拈抗。這些結(jié)果提示對藥物敏感度不同的NSCLC患者,需要從聯(lián)合用藥的方案和藥物劑量兩個角度考慮才有可能達到有效而不良反應(yīng)較少的給藥方法。
　　 采用western blot的方法分析了多種靶向藥物單獨或聯(lián)合作用對PI3K/Akt/mTOR/p70S6K和Ras/Raf/ERK/MAPK兩條通路上信號分子的影響,吉非替尼和依維莫司單藥可抑制mTOR、EGFR、p70S6K等信號分子

12、的磷酸化水平,聯(lián)合應(yīng)用時對這些位點的抑制作用進一步加強。吉非替尼可有效地彌補依維莫司對p-Akt和p-MAPK抑制作用不明顯甚至可引起反饋性活化的缺點。
　　 僅作用于PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信號通路的多種靶向藥物聯(lián)合不能有效抑制MAPK磷酸化表達水平,只有聯(lián)合吉非替尼才能有效抑制p-MAPK,說明了吉非替尼在靶向藥物聯(lián)合方案中的重要性。吉非替尼和依維莫司聯(lián)合應(yīng)用的方案可通過抑制PI3K/Akt/mTOR/p70