環(huán)孢素A通過抑制STAT3增加肺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼的敏感性.pdf

1、吉非替尼是第一代以表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)為靶點(diǎn)的可逆性小分子酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKI)，對(duì)具有EGFR敏感突變的晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)患者有著極好的療效，能夠顯著延長(zhǎng)患者生存時(shí)間，改善生活質(zhì)量。目前EGFR抑制劑已成為具有EGFR敏感突變的晚期NSCLC患者的一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)治療。然而，幾乎所有初始治療敏感的患者最終仍不可避免的出現(xiàn)了耐藥，多項(xiàng)臨床研究顯示其治療的中位疾病進(jìn)展時(shí)間(PFS)約為10個(gè)月。環(huán)孢素A(CsA)

2、作為一個(gè)多藥耐藥(MDR)相關(guān)蛋白抑制劑，能夠逆轉(zhuǎn)多種化療藥物的耐藥。最新研究發(fā)現(xiàn)CsA還可以通過抑制活化T細(xì)胞核因子（NFAT）克服小分子靶向藥物的耐藥，如伊馬替尼，達(dá)沙替尼，selumetinib等。CsA能否增敏EGFR-TKI，并進(jìn)一步克服耐藥尚未有報(bào)道。如何利用目前可以獲得的方法來逆轉(zhuǎn)EGFR-TKIs的耐藥值得進(jìn)一步的探索。
　　目的:
　　通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)，探討環(huán)孢素A聯(lián)合吉非替尼對(duì)EGFR-TKI敏感及耐藥肺癌

3、細(xì)胞增殖和凋亡的影響。并深入分析CsA增敏并逆轉(zhuǎn)吉非替尼耐藥的機(jī)制。
　　方法:
　　選取初始吉非替尼敏感及耐藥肺癌細(xì)胞株，并通過持續(xù)吉非替尼處理建立獲得性耐藥細(xì)胞株;采用MTS方法分析CsA是否可以增加各類肺癌細(xì)胞株細(xì)胞對(duì)于吉非替尼的敏感性;運(yùn)用流式細(xì)胞儀定量分析藥物處理后細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的改變;建立非小細(xì)胞肺癌裸鼠移植瘤模型評(píng)估CsA對(duì)吉非替尼在體內(nèi)的增敏作用;通過Western blot和免疫熒光分析CsA聯(lián)合吉非替

4、尼處理后的NSCLC細(xì)胞中STAT3，Akt，Erk以及NFAT1等與藥物敏感性相關(guān)分子的激活情況;并通過siRNA的方法確認(rèn)下調(diào)STAT3或NFAT1后各組肺癌細(xì)胞對(duì)吉非替尼敏感性的變化。進(jìn)一步收集經(jīng)EGFR-TKI治療的肺癌患者腫瘤樣本，分析腫瘤細(xì)胞中STAT3及其磷酸化水平與EGFR-TKI治療效果的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　在EGFR敏感突變、原發(fā)耐藥及獲得性耐藥的肺癌細(xì)胞株中，CsA均能提高吉非替尼的增殖抑制作用。進(jìn)

5、一步研究提示CsA可以增加吉非替尼誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，但未能影響吉非替尼對(duì)細(xì)胞周期的阻滯效果。
　　吉非替尼可以誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞株STAT3的激活，獲得性耐藥細(xì)胞株中p-STAT3的水平明顯高于其親本細(xì)胞株。CsA可以明顯抑制STAT3的激活，減少Bcl-2的表達(dá)，從而增敏吉非替尼。為了證實(shí)STAT3是CsA增敏吉非替尼的關(guān)鍵分子，我們進(jìn)一步用siRNA下調(diào)STAT3，結(jié)果發(fā)現(xiàn)STAT3的siRNA增敏效果與CsA類似，其可以促進(jìn)吉非替尼

6、的增殖抑制作用和增加細(xì)胞凋亡。而下調(diào)NFAT1未能實(shí)現(xiàn)增敏的效果。
　　裸鼠移植瘤模型進(jìn)一步證實(shí)CsA能夠增加吉非替尼對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。從給藥的第7天開始，CsA聯(lián)合吉非替尼組平均腫瘤體積較吉非替尼單藥組明顯縮小(p＜0.05)。聯(lián)合治療組腫瘤組織中p-STAT3和Bcl-2的表達(dá)均明顯低于吉非替尼單藥組。
　　我們進(jìn)一步分析了22例經(jīng)EGFR-TKI治療的患者臨床樣本，結(jié)果發(fā)現(xiàn)EGFR-TKI治療的效果與STAT3磷酸

7、化水平密切相關(guān)，p-STAT3高組治療的PFS顯著低于p-STAT3低組(p＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　CsA可以增加肺癌細(xì)胞對(duì)于吉非替尼治療的敏感性，其增敏作用主要通過增加吉非替尼誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡來實(shí)現(xiàn)。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)吉非替尼誘導(dǎo)的反饋性STAT3激活與肺癌細(xì)胞的藥物敏感性及耐藥密切相關(guān)，CsA通過抑制吉非替尼誘導(dǎo)的STAT3激活，下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，從而增敏各類肺癌細(xì)胞。吉非替尼聯(lián)合CsA可以作為NSCLC治療的一種新