利福平和異煙肼的肝臟毒性作用及部分機理.pdf

1、背景和目的：異煙肼和利福平均是WHO推薦的臨床抗結核治療一線藥物，也是我國急性藥物性肝損傷的重要病因。異煙肼和利福平聯合或單獨使用均具有肝臟毒性，長期服用異煙肼和利福平導致藥物性肝損傷，但異煙肼和利福平之間的相互作用尚未闡明。異煙肼肝臟毒性與其經CYP 2E1代謝后致氧化應激有關，饑餓誘導CYP 2E1表達，但饑餓是否加重異煙肼肝臟毒性尚不清楚。利福平和異煙肼聯合使用顯著升高大鼠肝臟甘油三酯和膽固醇水平，利福平或異煙肼單獨使用對肝臟脂質

2、代謝的影響需進一步研究。本課題通過研究 (1) 饑餓狀態(tài)對異煙肼肝臟毒性的影響，(2) 利福平單獨給藥對肝臟脂質代謝的影響，(3) 利福平聯合使用對異煙肼肝臟毒性作用的影響，進一步闡明兩種一線抗結核藥物的肝臟毒作用機理，為臨床合理用藥提供理論依據。
　　 方法：本研究由三部分組成。(1) 為研究異煙肼單獨對小鼠肝臟的損傷效應，將雌性ICR成年健康小鼠隨機分為對照組和異煙肼組，分別灌胃給予等容積的生理鹽水和異煙肼(100 mg/k

3、g)，連續(xù)處理1W。所有小鼠在末次異煙肼處理后均禁食6h處死和取材；為研究短期饑餓對異煙肼引起小鼠肝臟氧化應激的影響及其作用機理，將雌性ICR成年健康小鼠隨機分為四組：對照組、異煙肼組、饑餓組及饑餓+異煙肼組。對照組和異煙肼組分別灌胃給予等容積的生理鹽水或異煙肼(100 mg/kg)；饑餓組及饑餓+異煙肼組小鼠每天在給予生理鹽水或異煙肼前12 h及后6 h均禁食；所有小鼠均連續(xù)處理4 d，在末次異煙肼處理后均禁食6h處死和取材。用臨床全

4、自動生化分析儀檢測肝生化指標(ALT、AST、AKP)，用HE染色法觀察肝臟組織病理改變，用Griffith法測定肝臟組織還原型GSH含量，用TBARS法測定肝臟組織MDA含量，采用RT-PCR和Western blotting技術分別檢測肝組織cyp2e1 mRNA和蛋白表達。(2)為研究多次單獨給予利福平對肝臟脂質代謝的影響，將雌性ICR成年健康小鼠隨機分為對照組和利福平組，分別灌胃給予等容積的生理鹽水或利福平(200 mg/kg)

5、，連續(xù)處理1W；為研究單次單獨給予利福平對肝臟脂質代謝的影響，經口灌胃給予單劑量利福平(200 mg/kg)，給藥后不同時點(2h，6h或24h)取材；用臨床全自動生化分析儀檢測所有小鼠血清肝生化指標(ALT、AST、AKP、TBIL和TBA)及血清與肝臟脂質代謝相關的生化指標(TCH、TG、HDL、VLDL)；用HE染色法和油紅O染色法分別觀察利福平處理小鼠肝臟組織病理改變和小鼠肝臟脂質聚集的變化；用RT-PCR技術檢測肝臟脂肪酸合成

6、酶(Fasn)、乙酰輔酶A羧化酶(Acc)、硬脂酰輔酶A去飽和酶1(Scd-1)和清道夫受體(CD36) mRNA水平。(3) 為研究利福平對異煙肼引起肝臟發(fā)生氧化應激的影響及其機理，將雌性ICR成年健康小鼠隨機分為對照組、利福平組、異煙肼組及異煙肼+利福平組四個組，分別灌胃給予利福平(200mg/kg)或/和異煙肼(100mg/kg)，對照組給予等容量的溶劑，連續(xù)處理1 W。所有小鼠在末次給藥后均禁食6 h取材。用HE染色法觀察肝臟組

7、織病理改變，用Griffith法測定肝臟組織GSH 含量，用TBARS法測定肝臟組織MDA含量，采用RT-PCR和Western blotting技術分別檢測肝組織cyp2e1 mRNA和蛋白表達水平。
　　 結果：(1)異煙肼處理小鼠1W或4d后血清ALT和AST輕度升高，小鼠肝臟組織HE染色顯示肝細胞出現輕度壞死和炎癥。與對照組小鼠相比，短期饑餓或異煙肼單獨處理均能顯著降低小鼠肝臟 GSH含量并明顯升高肝臟脂質過氧化水平；與

8、異煙肼組小鼠相比，短期饑餓顯著降低異煙肼引起的小鼠肝臟GSH消耗并明顯升高異煙肼引起的脂質過氧化水平；短期饑餓或異煙肼分別處理均顯著上調小鼠肝臟CYP 2E1蛋白表達水平，且短期饑餓進一步增強異煙肼對小鼠肝臟CYP 2E1蛋白表達的上調作用。(2)利福平1W和單次處理的小鼠血清ALT水平輕度升高，TBA和TBIL水平均顯著升高，肝臟出現明顯的脂質聚集和脂肪變性現象，利福平連續(xù)1W處理顯著升高肝臟脂質代謝產物TCH、TG、HDL和VLDL

9、水平，單次處理后6h明顯升高小鼠肝臟脂質代謝產物TG、VLDL水平；利福平連續(xù)1W處理明顯上調小鼠肝臟Fasn和CD36的mRNA水平，單次處理后6h明顯上調Fasn、Acc和CD36的mRNA水平。(3) 異煙肼顯著升高小鼠肝臟組織脂質過氧化水平并降低GSH含量，利福平顯著減弱異煙肼引起的氧化應激效應；異煙肼顯著誘導肝臟組織CYP 2E1蛋白表達水平，利福平顯著抑制肝臟組織CYP 2E1蛋白表達水平；與單純異煙肼處理相比，利福平顯著減