鬼針草總黃酮的抗炎作用及部分機(jī)制研究.pdf

1、鬼針草(Bidens bipinnata L.)為菊科(Compositae)管狀花亞科鬼針草屬(Bidens L.)藥用植物,鬼針草總黃酮(total flavones of Bidens bipinnata L,TFB)是以本課題組以金盞銀盤為原料獲得的鬼針草乙醇提取物。前期研究證實(shí)TFB為鬼針草的有效成分,對CCL4誘導(dǎo)的化學(xué)性急性肝損傷及肝纖維化、豬血清誘導(dǎo)的免疫性肝纖維化及血吸蟲病肝纖維都有一定的治療作用。本研究擬建立急、慢性

2、炎癥模型,觀察TFB的抗炎作用并探討其可能機(jī)制。
　　目的:采用急性炎癥模型和免疫性炎癥模型研究鬼針草總黃酮(Total flavones of bidens bipinnata L,TFB)的抗炎作用,并探討其可能作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.采用二甲苯誘導(dǎo)急性小鼠耳腫脹模型,測量小鼠耳腫脹度和EILSA檢測小鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量,以觀察鬼針草總黃酮對急性小鼠耳腫脹的作用及可能機(jī)制。<

3、br>　　2.采用弗氏完全佐劑(Freund’s complete adjuvant,FCA)足趾皮內(nèi)注射誘導(dǎo)大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。測定大鼠原發(fā)性足腫脹度,采用ELISA方法檢測大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6和IL-8含量,HE染色觀察大鼠關(guān)節(jié)病理組織學(xué)變化,免疫組織化學(xué)法檢測大鼠關(guān)節(jié)軟骨組織ASIC1a蛋白的表達(dá),驗(yàn)證鬼針草總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠的原發(fā)性炎癥的保護(hù)作用及可能作用機(jī)制;并通過繼發(fā)性足腫脹度、多發(fā)性關(guān)節(jié)

4、炎指數(shù)(PI)等指標(biāo)觀察鬼針草總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠繼發(fā)性炎癥的治療作用,采用ELISA方法檢測繼發(fā)性炎癥大鼠血清TNF-α、IL-1、IL-2、IL-6和IL-8的含量,HE染色觀察大鼠關(guān)節(jié)病理組織學(xué)變化,并采用免疫組織化學(xué)法檢測大鼠關(guān)節(jié)軟骨組織OPG、RANKL和ASIC1a蛋白的表達(dá),以期闡明鬼針草總黃酮對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠繼發(fā)性炎癥的治療作用機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.與正常組比較,二甲苯誘導(dǎo)的模型小鼠耳腫脹程度顯著

5、增加(P<0.05),血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量均明顯升高(P<0.05),TFB(100、200mg·kg-1)ig給藥3天能明顯減輕二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹程度(P<0.05),并使耳腫脹小鼠血清中升高的TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量顯著降低(P<0.05)。
　　2.FCA足趾皮內(nèi)注射6h后AA模型大鼠致炎側(cè)開始出現(xiàn)足腫脹,并在18h腫脹度達(dá)到頂峰,其后開始減弱。TFB(67、133mg·k

6、g-1)ig給藥3天顯著減輕AA大鼠原發(fā)性足腫脹程度;與正常組比較,AA模型組大鼠原發(fā)性炎癥期血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量均明顯升高,IL-2含量明顯降低,TFB(67、133mg·kg-1)ig給藥可以明顯升高大鼠血清IL-2的含量(P<0.05),能在一定程度上降低血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量,病理組織學(xué)結(jié)果顯示TFB(67、133mg·kg-1)ig給藥3天可以使AA大鼠關(guān)節(jié)炎性細(xì)胞減少,減

7、輕炎性浸潤,改善病理變化,免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示模型組大鼠關(guān)節(jié)軟骨組織ASIC1a表達(dá)明顯升高,而TFB(67、133mg·kg-1)組ASIC1a的表達(dá)明顯降低。
　　與正常組比較,FCA足趾皮內(nèi)注射后d12、d16、d20、d24、d28AA模型大鼠非致炎側(cè)踝關(guān)節(jié)腫脹明顯(P<0.05),且多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)顯著增加(P<0.05),提示FCA足趾皮內(nèi)注射可誘導(dǎo)大鼠繼發(fā)性炎癥。TFB(67、133mg·kg-1)ig給藥能明顯增

8、加大鼠體重,減輕d12、d16、d20、d24、d28AA大鼠繼發(fā)性足腫脹度,降低多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)。ELISA結(jié)果顯示AA模型大鼠繼發(fā)性炎癥期血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量顯著升高而IL-2水平降低(P<0.05),TFB(67、133mg·kg-1)ig給藥可降低血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量,升高血清IL-2含量;病理組織學(xué)檢查結(jié)果證實(shí)TFB能改善大鼠關(guān)節(jié)炎癥癥狀并在一定程度上減輕軟骨破壞,免疫組