沙苑子黃酮抗輻射作用及作用機制的研究.pdf

1、目的：研究沙苑子黃酮(Flavonoids of Astragalus complanatus，F(xiàn)AC)抗輻射損傷的作用及作用機制。 方法：①本實驗建立60Coγ射線小鼠損傷模型，觀察FAC對輻射小鼠生存的保護作用，計算生存率；測定脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)和外周血象；用MTT方法進行ConA及LPS誘導脾淋巴細胞增殖試驗；蘇木素伊紅染色(hematoxylin and eosin，HE)切片觀察FAC對輻射造成損傷的保護作用。②采用H

2、2O2／Fe2+體系通過Fenton反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，鄰苯三酚自氧化系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基；采用分光光度法觀察FAC清除超氧陰離子自由基、羥基自由基和DPPH自由基的清除率及抑制線粒體腫脹和抑制紅細胞溶血的作用；組織勻漿法檢測輻射小鼠肝臟中的超氧化物歧化酶(SOD)、脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的含量和總抗氧化能力(T-AOC)的活力；Western Blot法觀察FAC對輻射小鼠肝臟中的核因子信

3、號轉(zhuǎn)導途徑的影響。③吉姆薩染色法觀察輻射小鼠骨髓微核率的變化；利用吸光度測量輻射小鼠骨髓DNA含量的變化，觀察FAC對受損細胞核的影響；通過單細胞凝膠電泳觀察FAC對H2O2氧化損傷的大鼠肝細胞株BRL中DNA鏈的保護作用。 結(jié)果：①FAC提高受輻射小鼠21 d存活率到100％，延長受輻射小鼠的存活時間；升高輻射小鼠外周血中的白細胞數(shù)、紅細胞數(shù)、血小板數(shù)和血紅蛋白數(shù)； FAC給藥組小鼠的T淋巴細胞和B淋巴細胞的增殖能力高于模型組

4、的增殖能力；FAC給藥組的小鼠脾臟和胸腺指數(shù)對比模型組顯著增加，免疫器官的損傷降低；HE切片結(jié)果顯示輻射后肝細胞失去正常的索狀結(jié)構(gòu)。肝細胞腫脹，發(fā)生脂肪變性，嚴重者肝細胞出現(xiàn)壞死，壞死的細胞核濃縮、碎裂、溶解，淋巴細胞和中性粒細胞浸潤。FAC治療組肝細胞的索狀結(jié)構(gòu)清楚，肝竇較正常，肝細胞呈輕微的顆粒變性，細胞壞死程度不明顯。②FAC能顯著升高SOD和GSH-Px的含量，可以抑制MDA的含量，恢復機體的總抗氧化能力：FAC的超氧陰離子自由

5、基、羥基自由基的清除率達到60％以上，對DPPH自由基的清除率為90％；對線粒體腫脹和紅細胞溶血的抑制率均達到50％以上；Western Blot結(jié)果顯示FAC可提高受輻射小鼠肝臟中NF-KB抑制蛋白I κ B-α的蛋白表達水平，降低NF-κ B蛋白家族成員p65的蛋白表達水平，提示FAC使氧自由基激活的核因子通路受阻。③FAC顯著降低受輻射損傷小鼠的骨髓微核率，提高DNA含量，單細胞凝膠電泳顯示FAC給藥后受損的BRL細胞的彗尾狀DN