CBP與STAT4-STAT6的功能相關關系研究及在哮喘Th失衡中的作用.pdf

1、在信號轉導和轉錄活化因子STAT家族的各成員中，主要被IL-12激活的信號轉導子和轉錄激活因子4（signal transducer and activator of transcription4 STAT4）蛋白和被IL-4激活的信號轉導子和轉錄激活因子6（signal transducer and activator of transcription6 STAT6）蛋白被認為在Th1/Th2的分化調控及因此失調引發(fā)的各種炎癥性疾病中

2、發(fā)揮著重要的作用。研究表明，許多轉錄因子通過競爭與協(xié)同激活分子CBP（cAMP效應元件結合蛋白）結合。CBP在STAT4和STAT6介導的基因轉錄過程中起著重要作用，STAT4和STAT6可能通過競爭性結合CBP上有限的位點而影響靶基因轉錄。在本課題前期研究中，通過改變細胞內STAT4和STAT6的量，以CBP介導，首次從蛋白質的角度證明了STAT4/STST6存在競爭性抑制關系. 目的：探討兩類重要核因子STAT4、STAT6

3、在CBP介導下是否在功能活性存在競爭性抑制關系。超表達CBP是否能解除這種抑制。 方法：構建含有能被STAT4特異性結合的IFN-γ啟動子的表達載體pCAT3-IFN-γ，構建含有能被STAT6特異性結合的IL-4受體啟動子區(qū)域的熒光素酶報告基因載體pGL3-IL-4R。用脂質體法將重組質粒及CBP表達質粒（由倫敦大學阮雄中教授友情饋贈）共轉染Jurkat細胞。通過改變胞外細胞因子含量，分別激活STAT4和STAT6，采用熒光素

4、酶（Luciferase，LUC）和氯霉素乙酰轉移酶（chlorampbeniol acetyltransferase，CAT）報告基因檢測系統(tǒng)分別測定LUC和CAT活性變化。增加CBP質粒轉入量，再測定LUC和CAT活性變化。 結果：經酶切和測序鑒定，重組質粒pCAT3-IFN-γ和pGL3-IL-4R構建成功。報告基因檢測顯示，在恒定的rhIL-4濃度條件下，增加rhIL-12濃度，LUC活性是逐漸降低的；反之，在恒定的rh