下調(diào)WAVE1對(duì)白血病自噬及化療敏感性影響的研究.pdf

1、目的:
　　探討WAVE1抑制后對(duì)HL-60細(xì)胞自噬及化療敏感性的影響。
　　方法:
　　首先將攜帶WAVE1shRNA病毒顆粒轉(zhuǎn)染HL-60細(xì)胞，通過流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR、Western blot方法驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效應(yīng);Western blot、電鏡檢測(cè)穩(wěn)定沉默WAVE1后自噬水平;CCK-8檢測(cè)下調(diào)WAVE1基因后對(duì)ADM化療敏感性的影響。
　　結(jié)果:
　　1.CCK-8結(jié)果示W(wǎng)AVE1 shRNA組及C

2、ontrol組在不同MOI值感染細(xì)胞對(duì)HL-60細(xì)胞生長(zhǎng)均無明顯抑制作用;
　　2.ControlshRNA組和WAVE1 shRNA組熒光顯微鏡下可見較多綠色熒光，未處理組無綠色熒光表達(dá);流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MOI=100時(shí)，轉(zhuǎn)染效率最高;與未經(jīng)處理組和Control組相比，轉(zhuǎn)染W(wǎng)AVE1 shRNA組的WAVE1 mRNA和蛋白水平均降低，證實(shí)穩(wěn)定下調(diào)WAVE1的HL-60細(xì)胞株構(gòu)建成功;
　　3.利用CCK-8方法檢測(cè)出嘌呤

3、霉素篩選濃度為8ug/ml;
　　4.ADM處理細(xì)胞48h后，與Control組比較，WAVE1 shRNA組LC3-Ⅱ水平明顯下降，電鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)自噬泡明顯減少，表明下調(diào)WAVE1能抑制ADM誘導(dǎo)的自噬。
　　5.細(xì)胞經(jīng)caspas-3抑制劑(Z-DEVE-FMK)預(yù)處理后，WAVE1shRNA組細(xì)胞存活率較未轉(zhuǎn)染組及Control組顯著下降，P＜0.05, n=3。
　　結(jié)論:
　　下調(diào)WAVE1的表達(dá)能抑