登革病毒2型誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞凝血與纖溶相關(guān)分子表達的研究.pdf

1、　　登革病毒2型誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細胞凝血與纖溶相關(guān)分子表達的研究
　　研究背景和目的：登革出血熱/登革休克綜合征(Dengue haemorrhagic fever/Dengue shock syndrome,DHF/DSS)主要臨床表現(xiàn)包括出血、血管通透性升高與低血容量性休克等,提示其發(fā)病機制可能涉及止血缺陷。血管內(nèi)皮細胞(vein endothelial cells,VECs)在調(diào)節(jié)血管滲透性和維持血液生理狀態(tài)等方面起重要作用,(

2、Dengue virus,DV)登革病毒能夠感染人VECs,但DV對VECs的促凝和抗凝活性是否存在影響尚不清楚。
　　VECs能夠合成分泌組織因子(tissue factor,TF)、組織因子抑制物(tissue factor inhibitor,TFPI)、血栓調(diào)節(jié)蛋白(thrombomodulin,TM)、組織纖溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,tPA)和組織纖溶酶原激活物抑制物1(ti

3、sslle plasrninogen activator inhibitor type-1,PAI-1)等多種重要分子,參與凝血級聯(lián)反應(yīng)和纖溶系統(tǒng)平衡。VECs有序合成這些分子對維持血流生理狀態(tài)起關(guān)鍵作用。在本研究中,應(yīng)用DV2感染人臍靜脈血管內(nèi)皮細胞(human umbilica vein endothelial cells,HUVECs),觀察DV2對HUVECs表達組織因子(TF)、組織因子抑制物(TFPI)和血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)

4、以及組織纖溶酶原激活物(tPA)和纖溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)的影響,以探索血管內(nèi)皮細胞在DHF/DSS的出血和血漿外滲等重要的病理生理過程所起的作用。
　　方法：應(yīng)用胰酶消化HUVECs并進行傳代培養(yǎng),用生長良好的第二、三代細胞進行試驗。同時應(yīng)用(cell counting Kit-8)CCK-8進行DV2感染前后的細胞活性測定；發(fā)色底物法測定DV2組和對照組培養(yǎng)上清液中tPA,PAI-1活性；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(rev