血小板第4因子對(duì)急性輻射損傷小鼠骨髓細(xì)胞周期調(diào)控作用的機(jī)制研究.pdf

1、骨髓造血器官是輻射敏感組織，電離輻射主要破壞造血細(xì)胞的增殖能力，損傷造血干/祖細(xì)胞的增殖分化潛能，引起細(xì)胞周期的紊亂，表現(xiàn)為G1 期阻滯，S期延遲和G2 期阻滯，致使DNA雙鏈斷裂，并誘發(fā)細(xì)胞凋亡。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，G1 期阻滯是機(jī)體對(duì)外界刺激的一個(gè)保護(hù)性反應(yīng)，可提供充足的時(shí)間來(lái)促使受損傷的DNA 在進(jìn)入DNA 合成和復(fù)制的S 期前得以修復(fù)。P53 是引起G1 期阻滯的核心分子。電離輻射作為特定的DNA 損傷因子率先誘導(dǎo)p53 基因表達(dá)，進(jìn)

2、而啟動(dòng)下游的WAF1／CIPl 基因，其蛋白產(chǎn)物p21 特異性地抑制Cyclin D 或Cyclin D/CDK4 復(fù)合物，CyclinD、CDK4 表達(dá)的下降及Cyclin D/CDK4 復(fù)合物活性的喪失使RB 蛋白不能磷酸化，E2F 不能釋放，使細(xì)胞周期停滯于G1 期。 血小板第4 因子（platelet factor 4，PF4）是由巨核細(xì)胞合成的造血負(fù)性調(diào)控因子，屬于CXC 趨化家族成員。先前的研究證實(shí)PF4 不僅能延長(zhǎng)

3、輻射損傷小鼠的生存時(shí)間、增加小鼠的存活率，而且能保護(hù)經(jīng)環(huán)磷酰胺（CTX）預(yù)處理小鼠骨髓的造血功能，減輕CTX 對(duì)胸腺、脾臟細(xì)胞的損傷。以往的文獻(xiàn)報(bào)道PF4 能對(duì)輻射損傷小鼠骨髓造血細(xì)胞起保護(hù)作用，主要是引起G1 期阻滯和S 期延遲，可逆性的阻滯G0/G1 期細(xì)胞進(jìn)入S 期，從而達(dá)到對(duì)輻射損傷的骨髓造血細(xì)胞的保護(hù)作用。但是PF4 造血保護(hù)作用的分子機(jī)理仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)在課題組先前研究的基礎(chǔ)上，通過(guò)對(duì)G1 期檢控點(diǎn)蛋白的檢測(cè)，初步探討PF4

4、 的造血保護(hù)作用機(jī)制。 本研究目的：檢測(cè)小鼠骨髓細(xì)胞p53，Cyclin D1，CDK4 蛋白表達(dá)量的變化，以探討PF4 對(duì)急性輻射損傷小鼠骨髓細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制。 方法：雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為三組，第Ⅰ組（正常對(duì)照組）、第Ⅱ組（單純照射組）、第Ⅲ組（PF4 保護(hù)組），第Ⅱ組在照射前26 h及20 h腹腔注射PF4 40μg/kg，第Ⅱ、Ⅲ組全身一次性5Gy60Co-γ射線照射，照射后4 h取小鼠骨髓細(xì)胞，West

5、ern-blotting方法檢測(cè)小鼠骨髓細(xì)胞內(nèi)p53、Cyclin D1、CDK4蛋白表達(dá)量的變化。 結(jié)果：與第Ⅰ組相比，第Ⅱ組、第Ⅲ組小鼠骨髓細(xì)胞p53 蛋白含量明顯升高，而Cyclin D1、CDK4 含量明顯降低（P＜0.05）；第Ⅱ組與第Ⅲ組p53 蛋白表達(dá)有明顯差異（P＜0.05），而Cyclin D1、CDK4 蛋白表達(dá)量未見(jiàn)顯著差異（P>0.05）。 結(jié)論：p53 蛋白的高表達(dá)在PF4 對(duì)急性輻射損傷小鼠骨