防輻膠囊對輻射損傷的防護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、隨著科學(xué)技術(shù)的現(xiàn)代化，核能在生產(chǎn)、科研、醫(yī)療、軍事等各方面得到了廣泛應(yīng)用，也因?yàn)槿绱?，人體受到放射線輻射的機(jī)會(huì)日益增多。同時(shí)由于艦艇的艙室環(huán)境存在高溫高濕、低劑量輻射等多種不良影響因素，因此低劑量電離輻射已經(jīng)成為核潛艇長航艇員健康受損的制約戰(zhàn)斗力的主要因素。本文通過中醫(yī)理論，以“扶正祛邪、虛則補(bǔ)之”為治則指導(dǎo)，篩選制定出防輻膠囊，依據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)，研究其在血液系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的防護(hù)作用，同時(shí)對其抗氧化和DNA損傷防護(hù)機(jī)制進(jìn)行分析。為今后中藥

2、復(fù)方在DNA損傷恢復(fù)和免疫等方面的深入研究提供理論基礎(chǔ)。
　　 [目的]
　　 運(yùn)用均勻設(shè)計(jì)法對防輻膠囊組成成分進(jìn)行組方優(yōu)化，并在組方優(yōu)化的基礎(chǔ)上對其進(jìn)行藥效學(xué)及防護(hù)機(jī)制研究。通過最大耐受量實(shí)驗(yàn)對防輻膠囊的安全性進(jìn)行評估。
　　 [方法]
　　 一、組方優(yōu)化
　　 采用均勻設(shè)計(jì)法，將防輻膠囊中的5味中藥，按照給藥配比分為12組。連續(xù)給藥14天。于給藥第7天，采用60Coγ源照射建立輻射損傷模型。并

3、于照射后第3天、7天，通過血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測血常規(guī)。每天稱量體重。通過以上指標(biāo)篩選出最佳組方。
　　 二、藥效學(xué)
　　 (1)將100只昆明種小鼠，雌雄各半，分為5組。連續(xù)給藥14d，于給藥第7天，采用60Coγ源照射建立輻射損傷模型。每天稱量體重，并觀察受照射小鼠的存活情況，連續(xù)30d，記錄小鼠的狀態(tài)和死亡數(shù)，計(jì)算小鼠30d存活率、提高率和保護(hù)系數(shù)。
　　 (2)將50只雄性昆明種小鼠，按體重隨機(jī)分為5組。連續(xù)給

4、藥14d，于給藥第7天，采用60Coγ源照射建立輻射損傷模型。每天稱量體重，于末次給藥后2h，摘眼球取血后脫頸處死，剖取出脾臟、胸腺及右側(cè)股骨。
　　 三、作用機(jī)制
　　 將40只雄性昆明種小鼠，按體重隨機(jī)分為5組。連續(xù)給藥14d，于給藥第7天，采用60Coγ源照射建立輻射損傷模型。照射后每天稱量體重，于末次給藥后2h，完成以下指標(biāo):
　　 骨髓DNA含量測定
　　 骨髓細(xì)胞微核率
　　 外周血彗

5、星實(shí)驗(yàn)
　　 PCR法對DNA-PKcs修復(fù)酶的檢測
　　 Western blot法對凋亡基因及P53的檢測
　　 流式細(xì)胞儀檢測脾臟細(xì)胞的凋亡與周期
　　 Elisa法對脾臟，胸腺caspase-3，caspase-9進(jìn)行檢測
　　 四、最大耐受量實(shí)驗(yàn)
　　 將40只昆明種小鼠，雌雄各半，按體重隨機(jī)分為正常組，給藥組，每組20只.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食禁水12h后，給藥組用最高藥物濃度和動(dòng)物的最

6、大胃容量灌胃，即以人口服劑量360倍作一次最大耐受量實(shí)驗(yàn)。2次/d給藥，正常組灌服同體積雙蒸水。給藥后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14d。
　　 [結(jié)果]
　　 一、組方優(yōu)化
　　 1、10種組方對輻射損傷小鼠體重的影響:
　　 12個(gè)組的小鼠初始體重均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。14d后末次體重，12個(gè)組的小鼠均有增長，與照射對照組比較，正常組與5號組方增長最為顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01，P＜0.05）。說明，5

7、號組方對輻射所致的小鼠體重下降有明顯的保護(hù)作用。
　　 2、10種組方對輻射損傷小鼠血液系統(tǒng)的影響:
　　 照射后第3天，7天，與照射對照組比較，照射后第3天時(shí)，10個(gè)組方組的RBC，WBC均有顯著性上升(P＜0.01)，其中只有5號組方的HGB提高有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01）。照射后第7天時(shí)，10個(gè)組方組的RBC，WBC，HGB均恢復(fù)明顯，有顯著性差異（P＜0.01）。說明，防輻膠囊的組方對輻射損傷具有防護(hù)作用，其中5

8、號組方的小鼠血象恢復(fù)與正常組差別最小，保護(hù)作用最為明顯。
　　 二、藥效學(xué)
　　 1、防輻膠囊對輻射損傷小鼠30d存活率、提高率和保護(hù)系數(shù)的影響:
　　 與正常組比較，照射對照組和各給藥組在照射后存活時(shí)間均減少。與照射對照組相比，給藥組小鼠的存活時(shí)間均增加，其中中劑量組與高劑量組增長具有顯著性差異(P＜0.01)。各組小鼠30d存活率分別為:正常組為100％，照射對照組為20％，低劑量組為45％，中劑量組為95％

9、，高劑量組為95％。
　　 2、防輻膠囊對輻射損傷小鼠血液系統(tǒng)防護(hù)作用:
　　 與照射對照組比較，3個(gè)劑量組的RBC，WBC，PLT, BMNC均有明顯上升，有顯著性差異（P＜0.01）。灌胃中劑量和高劑量防輻膠囊的小鼠脾臟指數(shù)有明顯提高（P＜0.01）。病理學(xué)觀察顯示，正常小鼠脾臟表面光滑無脾結(jié)節(jié)生成;γ射線照射后，小鼠脾臟萎縮、表面均可見白色的脾結(jié)節(jié)突起，顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)大量核固縮細(xì)胞，正常細(xì)胞量減少，雙核不正常細(xì)胞增

10、多。但灌胃防輻膠囊的小鼠在照射后脾結(jié)節(jié)生成數(shù)量明顯多于照射對照組，有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01），其中中劑量組脾結(jié)節(jié)生成數(shù)量最多，病理切片與正常組區(qū)別最小。
　　 3、防輻膠囊對輻射損傷小鼠免疫系統(tǒng)防護(hù)作用:
　　 與正常組比較，照射后脾臟T、B淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)能力和CD4+、CD8+活性均明顯下降，與照射對照組比較，灌胃不同濃度防輻膠囊小鼠的T、B淋巴細(xì)胞增殖能力均恢復(fù)，CD4+、CD8+活性上升，其中中劑量組和高

11、劑量組的恢復(fù)明顯，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01，P＜0.05）。給藥后的小鼠血清中的TGF-β1，IL-2，IL-10均有差異，其中中劑量和高劑量組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01，P＜0.05）。
　　 三、作用機(jī)制
　　 1、防輻膠囊對電離輻射造成的小鼠DNA損傷的防護(hù)作用:
　　 彗星實(shí)驗(yàn)及骨髓DNA含量實(shí)驗(yàn)均顯示，電離輻射對DNA損傷十分明顯，與正常組比較照射對照組有顯著性差異（P＜0.01）。由流式細(xì)胞儀檢

12、測得出:照射后的小鼠的脾臟細(xì)胞的凋亡明顯增加且細(xì)胞周期明顯被阻滯在G0/G1期，與照射對照組比較，給藥組的小鼠有明顯恢復(fù)，其中中劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.01，P＜0.05）。由PCR檢測發(fā)現(xiàn)，正常組和中劑量組，DNA-PKcs的表達(dá)水平顯著高于照射對照組(P＜0.05）。Western blot結(jié)果顯示:與照射對照組對比，給藥組P53和Bax蛋白的表達(dá)下降，Bcl-2的表達(dá)升高，且與給藥劑量成線性關(guān)系。
　　 2、防輻膠囊對

13、電離輻射造成的小鼠氧化損傷的防護(hù)作用:
　　 與正常組比較，照射后的小鼠外周血血清中的SOD及GSH-PX活性明顯降低，MDA含量明顯上升。與照射對照組比較，灌胃防輻膠囊的小鼠外周血血清中的SOD活性，MDA含量及GSH-PX活性均有顯著性差異（P＜0.01）。
　　 四、最大耐受量實(shí)驗(yàn)
　　 結(jié)果未見動(dòng)物發(fā)生死亡，灌藥后動(dòng)物活動(dòng)略有減少，無其他異常生物學(xué)特征，一般1h內(nèi)恢復(fù)正常。在2-14d內(nèi)行為精神狀態(tài)正常，