醋柳黃酮及其單體抑制心肌肥厚的機(jī)理研究.pdf

1、目的:
　　在培養(yǎng)原代大鼠心肌細(xì)胞的基礎(chǔ)上,用血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)新生大鼠心肌細(xì)胞肥大為模型,探討醋柳黃酮及其單體(槲皮素與異鼠李素)抑制心肌肥厚的作用機(jī)理是否與鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶信號通路有關(guān)。
　　方法:
　　取新生SD大鼠心肌細(xì)胞(1-3d),運(yùn)用差速貼壁分離法提純后進(jìn)行培養(yǎng)。心肌細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)72小時,換無血清培養(yǎng)基同步化24小時后,分別加入不同藥物進(jìn)行孵育。實驗分組:①對照組(Control):不加任何處理因素,與加入處

2、理因素的組別共同進(jìn)行換液處理;②模型組(AngⅡ):加入AngⅡ10-6mol/L,建立心肌肥厚模型;③醋柳黃酮組(TFH group):預(yù)先加入醋柳黃酮100mg/L,再加入AngⅡ10-6mol/L;④槲皮素組(Quer group):預(yù)先加入槲皮素100umol/L,再加入 AngⅡ10-6mol/L;⑤異鼠李素組(Isor group):預(yù)先加入異鼠李素100umol/L,再加入AngⅡ10-6mol/L;⑥纈沙坦組(Valsa

3、rtan group):預(yù)先加入纈沙坦10-6mol/L,再加入 AngⅡ10-6mol/L。采用抗α-actin免疫組化鑒定心肌細(xì)胞;Image-Pro Plus專業(yè)圖像處理軟件測定細(xì)胞表面積;考馬斯亮藍(lán)法測定細(xì)胞總蛋白含量;采用p-NPP酶法測定心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)鈣泵( Sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPases,SERCA)活力;定磷法測定鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin,CaN)活性及RT-PCR法

4、半定量測定CaN mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果:
　?、判募〖?xì)胞鑒定:心肌細(xì)胞經(jīng)抗α-actin免疫細(xì)胞化學(xué)染色后,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)可見棕黃色絲狀物,證實為心肌細(xì)胞。
　?、菩募〖?xì)胞表面積:與control組比較,AngII組的細(xì)胞表面積顯著增加(761.75±95.09 vs498.27±67.31um2, P<0.01),其余各組細(xì)胞表面積的增加無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與AngII組相比,Valsartan組、Quer組

5、、Isor組及TFH組的細(xì)胞表面積分別減小(552.07±93.48 vs761.75±95.09um2, P<0.01)、(584.22±109.42 vs761.75±95.09um2, P<0.01)、(611.02±149.38 vs761.75±95.09um2, P<0.01)、(572.05±104.37 vs761.75±95.09um2, P<0.01);但這四組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　?、切募?/p>

6、細(xì)胞總蛋白含量:與control組比較,AngII組的細(xì)胞總蛋白含量明顯增加(4.61±1.42 vs2.63±0.79ng/well, P<0.01),其余各組細(xì)胞總蛋白含量的增加無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與AngII組相比,Valsartan組與TFH組的細(xì)胞總蛋白含量分別減小(3.04±0.86 vs4.61±1.42 ng/well,P<0.01)、(3.10±0.52 vs4.61±1.42 ng/well,P<0.01)

7、;Isor組與Quer組的細(xì)胞總蛋白含量分別減小(3.25±0.94 vs4.61±1.42ng/well,P<0.05)、(3.41±0.75 vs4.61±1.42 ng/well,P<0.05);但這四組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　?、燃{網(wǎng)鈣泵(SERCA)活力:與control組比較,AngII組的SERCA活力明顯下降(2.36±0.99 vs4.11±1.19umol/g pro·min, P<0.01

8、),其余各組SERCA活力下降無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與AngII組相比,Valsartan組、Isor組、Quer組及TFH組的SERCA活力均升高(3.89±1.12 vs2.36±0.99umol/g pro·min, P<0.05)、(3.55±1.36 vs2.36±0.99umol/g pro·min, P<0.05)、(3.41±0.79 vs2.36±0.99umol/g pro·min, P<0.05)、(3.5

9、2±0.48 vs2.36±0.99umol/g pro·min, P<0.05);但這四組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　⑸鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(CaN)活性:與control組比較,AngII組的CaN活性顯著升高(0.50±0.13 vs0.25±0.09U/mg prot, P<0.01),其余各組CaN活性升高無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。與AngII組相比,Valsartan組、Quer組、Isor組及TFH組的

10、SERCA的CaN活性分別降低(0.32±0.14 vs0.50±0.13 U/mg prot, P<0.05)、(0.37±0.10 vs0.50±0.13 U/mg prot, P<0.05)、(0.39±0.11vs0.50±0.13 U/mg prot, P<0.05)、(0.36±0.15 vs0.50±0.13 U/mg prot, P<0.05);但這四組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　?、殊}調(diào)神經(jīng)磷酸酶(

11、CaN)mRNA的表達(dá):AngII組、Isor組、Quer組、TFH組及Valsartan組在心肌細(xì)胞中(CaN)mRNA的表達(dá)均高于Control組(P<0.05), AngII組最高(P<0.01)。與AngII組相比,Valsartan組、Quer組、Isor組及TFH組的CaNmRNA表達(dá)量分別降低(1.29±0.08 vs1.84±0.11, P<0.01)、(1.36±0.04 vs1.84±0.11, P<0.01)、(1