脂氧素A4誘導HO-1改善炎癥性肺血管內皮細胞損傷的研究.pdf

1、目的:
　　觀察脂氧素A4(LXA4)誘導血紅素加氧酶-1(heme oxygenase-1，HO-1)表達對腫瘤壞死因子-α（Tumor necrosis factor a，TNF-α）引起人肺微血管內皮細胞(Human pulmonary microvascular endothelia cells，HPMEC)炎癥損傷的保護作用及相關通路PI3K/Akt影響的機制。
　　方法:
　　實驗分為兩部分:
　　(

2、1)針對LXA4誘導HO-1表達的通路研究，實驗分組為:對照組、LXA4(50ng/mL)處理組、抑制劑(LXA450ng/mL+LY29400220μ M)干預組、激動劑組(IGF-150ng/mL)。蛋白質免疫印跡(WesternBlotting)對PI3K/Akt通路中關鍵蛋白p-Akt、Akt，HO-1及其調控關鍵蛋白p-Nrf2、Nrf2、Keap1、核內Nrf2進行定量檢測，細胞免疫熒光對Nrf2核內外表達進行定位檢測;

3、r>　　(2)針對LXA4對炎癥損傷的保護作用的研究，實驗分組為:對照組、TNF-a刺激組(50ng/mL)、LXA4干預組(TNF-a50ng/mL+LXA450ng/mL)、抑制劑組(Znpp-IX0.5μ M預處理12H，TNF-a50ng/mL+LXA450ng/mL)。通過BCECF/AM熒光標記THP-1細胞對HPMEC黏附性進行檢測分析，通過JC-1線粒體膜電位試劑盒對HPMEC線粒體膜電位進行檢測。
　　結果:

4、r>　　(1)LXA4引起HO-1蛋白表達增高呈劑量相關性，且在50ng/ml時差異顯著;
　　(2)LXA4通過激活PI3K/Akt通路引起Nrf2磷酸化，同時LXA4引起Keap1構型該表，導致Nrf2與Keap1聚合體解聚，Nrf2轉入核內與ARE結合域結合，上調HO-1表達，對細胞起保護作用;
　　(3)LXA4通過HO-1逆轉TNF-α導致線粒體膜電位改變減輕HPMEC細胞凋亡水平發(fā)揮細胞保護作用;
　　(4