2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   觀察血管生成素-1(angiopoietin-1,Ang-1)對脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)誘導(dǎo)的小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(pulmonarymicovascularendothelialcells,PMVEC)炎癥及凋亡的影響,探討Ang-1的抗炎和抗凋亡作用及其對PMVEC的保護(hù)機(jī)制。
   方法:
   1.新生小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代、純化及鑒定。2.CCK

2、8法測不同濃度的LPS(0ng/ml(對照組)、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)及Ang-1(0ng/ml(對照組)、1ng/ml、10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml)作用于小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞后對其增值能力的影響,以確定最佳干預(yù)濃度。3.將分離培養(yǎng)的小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞隨機(jī)分為7組:(A)空白對照組;(B)LPS組;(C)LPS+Ang-1組;(D)LPS+Ang-1+LY2940

3、02組;(E)Ang-1組;(F)LY294002組;(G)DMSO組。4.各組細(xì)胞藥物干預(yù)24小時(shí)后測定相關(guān)指標(biāo)。ELISA法測各組細(xì)胞上清液中細(xì)胞因子IL-8、TNF-α的表達(dá);流式細(xì)胞儀AnnexinV/PI法測各組細(xì)胞早期凋亡率;酶標(biāo)儀檢測各組細(xì)胞凋亡基因Caspase-3活性;Westernblotting法測各組細(xì)胞PI3K、P-AKT蛋白的表達(dá)。
   結(jié)果:
   1.倒置顯微鏡下PMVEC呈典型的鵝卵石

4、或鋪路石樣的形態(tài)學(xué)特征,免疫熒光法鑒定PMVEC的CD31抗原表達(dá)陽性。2.LPS終濃度為l00ng/ml時(shí)明顯抑制PMVEC增殖(OD值:0.56±0.14),與對照組(OD值:1.08±0.22)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Ang-1終濃度為l00ng/ml時(shí)明顯促進(jìn)PMVEC增值(OD值:1.44±0.28),與對照組(OD值:1.07±0.24)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.LPS組IL-8、TNF-α

5、的表達(dá)、早期凋亡率、Capase-3酶活力單位分別為(780±22pg/ml、360±20pg/ml、13.00±0.58%、1.21±0.12),與對照組(220±16pg/ml、50±14pg/ml、4.50±0.44%、0.30±0.09)比較明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.01);LPS+Ang-1組IL-8、TNF-α的表達(dá)、早期凋亡率、Capase-3酶活力單位分別為(450±17pg/ml、220±13pg/ml、

6、6.10±0.58%、0.59±0.13)與LPS組比較明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05);而Ang-1+LPS+LY294002組IL-8、TNF-α的表達(dá)與Ang-1+LPS相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但早期凋亡率(10.3±0.50%)、Caspase-3酶活力單位(0.92±0.11)與Ang-1+LPS組比較顯著上升,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。LPS組中PI3K、P-AKT蛋白表達(dá)水平明顯低于對

7、照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);Ang-1+LPS組中PI3K、P-AKT蛋白表達(dá)水平較LPS組明顯上升(P<0.05);Ang-1+LPS+LY294002組與Ang-1+LPS相比,PI3K、P-AKT蛋白表達(dá)水平明顯下降(P<0.05);此外,LY294002組與對照組相比,明顯抑制了PI3K和P-AKT蛋白分子的表達(dá)(P<0.05);而Ang-1組與對照組相比,又明顯增加了PI3K和P-AKT蛋白分子的表達(dá)(P<0.0

8、5);而DMSO組,對照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
   結(jié)論:
   LPS作用于PMVEC可誘導(dǎo)其發(fā)生炎性反應(yīng)及凋亡損傷,Ang-1對LPS誘導(dǎo)的PMVEC具有抗炎及抗凋亡的保護(hù)作用。PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與了Ang-1的保護(hù)作用,PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受到抑制或阻滯時(shí),Ang-1對LPS誘導(dǎo)的小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用有所降低。Ang-1可能通過調(diào)節(jié)PI3K/AKT通路中的

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