利用基因打靶技術(shù)構(gòu)建結(jié)核分支桿菌Rv0901基因缺失株的研究.pdf

1、結(jié)核病是由結(jié)核桿菌引起的一種傳染病,結(jié)核桿菌由于其獨(dú)特的致病和流行傳播方式,加之近年來多耐藥性結(jié)核桿菌的產(chǎn)生以及結(jié)核桿菌與人類免疫缺陷癥病毒(HIV)的交叉伴發(fā)感染等原因使結(jié)核病的流行再度呈現(xiàn)上升趨勢,全球結(jié)核病的防治工作形勢嚴(yán)峻.目前世界上許多國家都加大了對結(jié)核病的防治力度,嚴(yán)格執(zhí)行直接面視下的短程化學(xué)療法(簡稱DOTS),同時也積極開展結(jié)核病的基礎(chǔ)和臨床科研工作,探索預(yù)防和治療結(jié)核病的新方法,以便更有效地控制結(jié)核病.自1921年以來

2、,BCG就一直廣泛應(yīng)用于結(jié)核病的預(yù)防接種,目前在全球已接種超過了30億人次,大量研究表明BCG對兒童原發(fā)型結(jié)核病具有較好的預(yù)防作用,但對作為結(jié)核病主要流行和傳播形式的成人結(jié)核病,BCG預(yù)防效果較差.由于目前對結(jié)核桿菌毒力基因了解仍舊有限,距離安全闡明結(jié)核桿菌毒力基因,尤其是與其侵襲力、生活力及抗藥性產(chǎn)生密切相關(guān)的一些重要基因的功能還有相當(dāng)?shù)木嚯x.Rv0901基因編碼的蛋白是尚未確定其生物特征和功能的假想蛋白,屬于結(jié)核桿菌特異性蛋白成分,

3、位于結(jié)核桿菌胞膜表現(xiàn),呈表面暴露或?qū)俜置诘鞍孜镔|(zhì).其疏水性N末端與麻風(fēng)桿菌毒素蛋白TR03307相似,我們推想它可能是結(jié)核桿菌毒力相關(guān)基因.為驗證這一推想,該研究采用基因打靶技術(shù)構(gòu)建了結(jié)核桿菌Rv0901基因缺失株以用于進(jìn)一步通過動物實(shí)驗研究其毒力和功能.首先構(gòu)建用于基因打靶的特異性傳遞載體,該載體包含用于同源重組的缺失靶基因序列和篩選標(biāo)記,然后用電穿孔法將自殺質(zhì)粒pRKS10轉(zhuǎn)入結(jié)核桿菌標(biāo)準(zhǔn)毒力株H37Rv中,篩選獲得結(jié)核桿菌Rv09