豬Tiki基因的初步研究及Tiki1基因打靶載體的構建.pdf

1、本文對豬Tiki基因的表達進行了初步的研究,并成功構建了豬Tiki1基因置換型打靶載體。Tiki基因為哈佛大學兒童醫(yī)學院賀熹教授的實驗室最新發(fā)現(xiàn)的基因,在Wnt信號通路中作為抑制因子而發(fā)揮作用。Tiki基因包括Tiki1和Tiki2兩種,其中Tiki1基因在嚙齒類動物(如小鼠和大鼠)的體內(nèi)缺失。在蛙胚胎早期發(fā)育的過程中,Tiki1的原位雜交表明其分布在胚胎體軸的前端,暗示對于體軸前端結構的發(fā)育起作用,而在蛙上進行的功能研究實驗證實了Ti

2、ki1確實在頭部誘導的過程中起著決定性的作用,類似于Wnt信號通路中的另一抑制因子DKK-1。但由于小鼠體內(nèi)缺乏Tiki1基因的表達,使用小鼠作為研究人類Tiki1基因缺失疾病模型的傳統(tǒng)途徑被阻斷,與人類在生理學、病理學上都極為相近的豬成為研究Tiki1功能的理想哺乳動物模型。本實驗用PCR的方法在成體豬的肝臟、肺、乳腺和卵巢四種器官中檢測到Tiki1基因的表達,在心臟中檢測到了Tiki2基因的表達。從上述器官中獲取的Tiki1和Tik

3、i2部分cDNA片段測序結果與不同物種的比對顯示,我們獲取Tiki基因部分片段在不同物種中具有高度同源性(80％以上),說明此基因高度保守,可能具有重要的功能。為了和Tiki基因在蛙和鼠上的表達模式做對比,對12-15天,即原條期到神經(jīng)溝階段的豬胚胎進行了全胚胎原位雜交,實驗結果顯示Tiki1基因在胚胎前端邊緣處表達,說明在豬的胚胎發(fā)育過程中Tiki1極有可能像在蛙上一樣,對頭部的誘導起著關鍵性的作用。在豬胚胎上進行的Tiki2基因的原

4、位雜交結果和Tiki2在鼠胚胎上的原位雜交結果是一致的,均為沿著胚胎的中軸線縱向分布,且信號不強,貌似在胚胎中的表達豐度也不及Tiki1基因。為了進一步地證實豬Tiki1是否具有頭部誘導的功能,本實驗成功構建了豬Tiki1基因置換型打靶載體并進行了初步的細胞篩選,以期在后續(xù)的研究中對Tiki基因在豬胚胎早期發(fā)育的過程中的作用做進一步的探索?？傊?本文對豬Tiki基因的表達進行了初步的研究,并成功地構建了豬Tiki1基因置換型打靶載體。本