雞輸卵管組織特異性基因打靶載體的構(gòu)建及誘導(dǎo)雞免疫耐受模型的建立.pdf

1、二十多年來(lái)，用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物蛋白已經(jīng)取得了突破性進(jìn)展，具有廣闊的應(yīng)用前景。與哺乳動(dòng)物相比，禽類具有個(gè)體小，繁殖率高，世代間隔短，蛋中可以獲得目的基因產(chǎn)物等優(yōu)勢(shì)。但是由于禽類的獨(dú)特的生殖生理特點(diǎn)，雞輸卵管生物反應(yīng)器的開發(fā)相對(duì)落后。本研究首先構(gòu)建了雞輸卵管組織特異性基因打靶載體和分泌型融合表達(dá)載體，將后者轉(zhuǎn)染雞法氏囊淋巴細(xì)胞(DT40)系，篩選得到了可穩(wěn)定表達(dá)并分泌人Leptin和GFP的細(xì)胞，為轉(zhuǎn)基因雞的研究和輸卵管生物反應(yīng)器的制備奠

2、定了基礎(chǔ)。同時(shí)，為了解決外源基因產(chǎn)物引起宿主免疫應(yīng)答的問題，本文通過在雞胚發(fā)育早期的不同階段，采用胚胎血管微注射和卵黃注射兩種方式，將外源蛋白抗原引入雞胚，誘導(dǎo)了出生后小雞對(duì)同種抗原的免疫耐受，獲得了完全免疫耐受和部分免疫耐受的個(gè)體。結(jié)果表明，構(gòu)建的卵清蛋白基因打靶載體和分泌型融合表達(dá)載體為轉(zhuǎn)基因雞的研究提供了上游元件；可穩(wěn)定表達(dá)并分泌人Leptin和GFP的細(xì)胞系，為利用雞核移植法和嵌合體法制備輸卵管生物反應(yīng)器奠定了基礎(chǔ)；誘導(dǎo)雞免疫耐