下調(diào)wnt-2基因表達(dá)對(duì)MGC803生長(zhǎng)增殖的影響.pdf

1、目的：針對(duì)wnt-2基因序列，設(shè)計(jì)與構(gòu)建siRNA干擾序列，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染胃癌MGC-803細(xì)胞，研究wnt-2基因表達(dá)降低對(duì)MGC-803細(xì)胞生長(zhǎng)增殖及遷移的影響，探討wnt-2基因與胃癌的關(guān)系。
　　方法：采用生物信息學(xué)分析，篩選特異的wnt-2基因siRNA干擾序列，公司合成靶向wnt-2基因的siRNA干擾序列，用Lipofectamin2000介導(dǎo)瞬轉(zhuǎn)胃癌MGC-803細(xì)胞系；并將轉(zhuǎn)染wnt-2 siRNA的細(xì)胞作為wnt-2

2、 siRNA組，轉(zhuǎn)染scramblesiRNA的細(xì)胞為scramble組，未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞為空白對(duì)照組。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后分別通過(guò)RT-PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)各組胃癌細(xì)胞中wnt-2基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平。利用劃痕試驗(yàn)比較各組胃癌MGC-803細(xì)胞系的遷移能力；MTT試驗(yàn)觀察各組細(xì)胞的生長(zhǎng)情況。
　　結(jié)果：
　　1.RT-PCR結(jié)果顯示，wnt-2 siRNA組較scramble組和空白對(duì)照組wnt-2基因在mR

3、NA水平降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　2.Western blot結(jié)果顯示，wnt-2蛋白在wnt-2 siRNA組中表達(dá)較scramble組和空白對(duì)照組降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　3.MTT檢測(cè)結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，wnt-2 siRNA組OD值(0.23±0.03)與scramble組（0.42±0.01）、空白對(duì)照組（0.47±0.03）對(duì)比，細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度下降（p<0.05

4、），轉(zhuǎn)染72小時(shí)后wnt-2 siRNA組（0.35±0.02）與scramble組（0.70±0.04）、空白對(duì)照組（0.72±0.02）對(duì)比，細(xì)胞生長(zhǎng)增殖速度顯著下降（p<0.05），scramble組與空白對(duì)照組細(xì)胞增殖能力無(wú)明顯差異（p>0.05）。
　　4.劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：劃痕48小時(shí)后wnt-2 siRNA組MGC-803細(xì)胞愈合率（18％±2.0%）較scramble組（41%±3.3%）及空白對(duì)照組（53%±2.