荔枝核皂苷對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞活化的抑制.pdf

1、目的:研究荔枝核皂苷對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞活化的抑制作用及其初步機(jī)制。
　　方法:CCK-8試劑盒檢測(cè)Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞活化的最佳濃度及作用時(shí)間、荔枝核皂苷對(duì)BV-2細(xì)胞的最大安全濃度及其抑制Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞活化最適有效濃度;倒置顯微鏡觀察BV-2細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變;20μmol·L-1 Aβ25-35作用于BV-2細(xì)胞24h誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞活化;Spss統(tǒng)計(jì)軟件經(jīng)對(duì)數(shù)曲線法計(jì)算Aβ25-35誘導(dǎo)

2、BV-2細(xì)胞活化的IC50。RT-PCR半定量測(cè)定TNF-α mRNA表達(dá);免疫印跡法檢測(cè)TNF-α蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:1.BV-2細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化:顯微鏡下(×400)， Aβ25-35作用于BV-2細(xì)胞6h、12h、24h后，細(xì)胞數(shù)量減少，胞體均有不同程度的肥大，胞核增大且不規(guī)則，部分細(xì)胞核發(fā)生融合，胞體梭形，伸出多個(gè)突起（靜息態(tài)的分枝狀→活化態(tài)的阿米巴狀），并相互連接，隨著作用時(shí)間延長(zhǎng)，BV-2細(xì)胞數(shù)量、形態(tài)改變更為明顯。荔

3、枝核皂苷+Aβ25-35+BV-2細(xì)胞共同培養(yǎng)24h后，荔枝核皂苷干預(yù)組BV-2的形態(tài)學(xué)改變較模型組(Aβ25-35+BV-2細(xì)胞培養(yǎng)24h)明顯減輕。2.Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞活化的最適濃度及時(shí)間:不同濃度的Aβ25-35分別作用BV-2細(xì)胞6h、12h、24h，其抑制率隨著時(shí)間的延長(zhǎng)均相應(yīng)升高，其中以24h的抑制率最高。與6h比較，20μmol·L-1Aβ25-35及以下濃度對(duì)BV-2細(xì)胞的抑制率在24h明顯升高（P＜0.0

4、5）;160、80μmol·L-1Aβ25-35在各時(shí)間點(diǎn)抑制率均超過(guò)50％;40μmol·L-1在12h和24h的抑制率＞50％，20μmol·L-1Aβ25-35只有在24h抑制率＞50％，20μmol·L-1Aβ25-35在其它時(shí)間點(diǎn)及以下濃度對(duì)BV-2細(xì)胞的抑制率在各時(shí)間點(diǎn)均＜50％，且隨著Aβ25-35濃度降低，抑制率也逐漸下降，但當(dāng)濃度大于40μmol·L-1其抑制率又明顯上升。Aβ25-35在各時(shí)間點(diǎn)對(duì)BV-2細(xì)胞抑制率1

5、60μmol·L-1＞80μmol·L-1＞40μmol·L-1＞20μmol·L-1＞10μmol·L-1＞5μmol·L-1＞2.5μmol·L-1。Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞的IC50為15.49μmol·L-1，與IC50最接近濃度20μmol·L-1Aβ25-35的最大抑制率發(fā)生在24h。提示:20μmol·L-1Aβ25-35作用BV-2細(xì)胞24h可以明顯誘導(dǎo)BV-2活化。3.荔枝核總皂苷對(duì)BV-2細(xì)胞最大無(wú)毒濃度及其抑

6、制Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞活化的有效濃度:荔枝核皂苷對(duì)BV-2細(xì)胞的最大安全或無(wú)毒濃度為3.75mg·L-1，即荔枝核皂苷濃度≤3.75mg·L-1時(shí)，對(duì)BV-2細(xì)胞的活性無(wú)抑制效應(yīng)。與模型組比較，0.469～3.75mg·L-1荔枝核皂苷均可抑制20μmol·L-1Aβ25-35誘導(dǎo)的BV-2細(xì)胞活化，其抑制作用強(qiáng)弱3.75 mg·L-1＞1.875 mg·L-1＞0.938 mg·L-1＞0.469 mg·L-1，即荔枝核皂苷

7、抑制Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)胞活化的有效濃度在0.469～3.75 mg·L-1之間。4.TNF-α mRNA表達(dá):與對(duì)照組比較，模型組（20μmol·L-1Aβ25-35+BV-2細(xì)胞）TNF-α mRNA表達(dá)水平明顯升高;與模型組比較，不同濃度荔枝核皂苷+20μmol·L-1Aβ25-35+BV-2細(xì)胞作用24h后，4個(gè)不同濃度的荔枝核皂苷均可降低TNF-α mRNA表達(dá)，但4個(gè)劑量組間比較差異不明顯。5.TNF-α蛋白表達(dá):與

8、對(duì)照組比較，模型組（20μmol·L-1Aβ25-35+BV-2細(xì)胞）TNF-α蛋白表達(dá)條帶的灰度值明顯升高(P＜0.05);與模型組比較，不同濃度荔枝核皂苷作用于20μmol·L-1Aβ25-35+BV-2細(xì)胞24h后，4個(gè)不同濃度的荔枝核皂苷均可降低TNF-α蛋白表達(dá)條帶的灰度值(P＜0.05)，但4個(gè)劑量組間比較差異不明顯。
　　結(jié)論:荔枝核皂苷在(0.469～3.75) mg·L-1濃度之間，對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)BV-2細(xì)